24小时热门版块排行榜    

查看: 1211  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆

最近在用试剂盒做启动子克隆,用F2(接头)和下游引物R进行PCR得到一段约2000bp的条带,F1到R之间片段是已知的。
将这个条带连接,转化到大肠杆菌。用F1和R进行菌液检测后,送去公司测序。
结果测序结果是插入的片段只有200多,而且能找到F1和R,这是怎么回事?明明是2000bp的条带,怎么变成了200bp?


[ Last edited by xiazhiwuxie on 2012-4-10 at 11:24 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mjzjily at 2012-04-10 13:24:57:
能把您的实验思路说的详细些吗?不大了解你的具体思路。我刚开始做启动子的筛选,以后可以多多请教您哈~~·

我就是做已知基因的克隆,用得的genomic walking kit,原理跟5‘RACE差不多的。在下游设计几对内嵌的引物,做巢式PCR
5楼2012-04-11 09:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

有没有人顶一下啊?
2楼2012-04-10 11:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-04-10 11:26:29:
有没有人顶一下啊?

嗯.....
测序使用的是通用引物吗?
你做阳性鉴定时候,最好拿通用引物测一下
指测200bp有没有是不可靠的,载体再强再专一也经常连些乱七八糟的东西上去的
个人看法 若有说错希望高手指点

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Let God do with it as He wills
3楼2012-04-10 11:35:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mjzjily

铜虫 (初入文坛)

能把您的实验思路说的详细些吗?不大了解你的具体思路。我刚开始做启动子的筛选,以后可以多多请教您哈~~·
扎实科研
4楼2012-04-10 13:24:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 274求调剂 +5 顾九笙要谦虚 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:43 by jhhcooi
[考研] 材料学硕,求调剂 6+3 糖葫芦888ll 2026-03-22 7/350 2026-03-24 17:11 by hello七七
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见