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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

[求助] 启动子克隆

最近在用试剂盒做启动子克隆,用F2(接头)和下游引物R进行PCR得到一段约2000bp的条带,F1到R之间片段是已知的。
将这个条带连接,转化到大肠杆菌。用F1和R进行菌液检测后,送去公司测序。
结果测序结果是插入的片段只有200多,而且能找到F1和R,这是怎么回事?明明是2000bp的条带,怎么变成了200bp?


[ Last edited by xiazhiwuxie on 2012-4-10 at 11:24 ]
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

有没有人顶一下啊?
2楼2012-04-10 11:26:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiazhiwuxie at 2012-04-10 11:26:29:
有没有人顶一下啊?

嗯.....
测序使用的是通用引物吗?
你做阳性鉴定时候,最好拿通用引物测一下
指测200bp有没有是不可靠的,载体再强再专一也经常连些乱七八糟的东西上去的
个人看法 若有说错希望高手指点

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Let God do with it as He wills
3楼2012-04-10 11:35:08
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mjzjily

铜虫 (初入文坛)

能把您的实验思路说的详细些吗?不大了解你的具体思路。我刚开始做启动子的筛选,以后可以多多请教您哈~~·
扎实科研
4楼2012-04-10 13:24:57
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mjzjily at 2012-04-10 13:24:57:
能把您的实验思路说的详细些吗?不大了解你的具体思路。我刚开始做启动子的筛选,以后可以多多请教您哈~~·

我就是做已知基因的克隆,用得的genomic walking kit,原理跟5‘RACE差不多的。在下游设计几对内嵌的引物,做巢式PCR
5楼2012-04-11 09:00:26
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-10 11:35:08:
嗯.....
测序使用的是通用引物吗?
你做阳性鉴定时候,最好拿通用引物测一下
指测200bp有没有是不可靠的,载体再强再专一也经常连些乱七八糟的东西上去的
个人看法 若有说错希望高手指点

如果是乱起八糟的片段连接上去,为什么能找到我的引物序列呢,而且那200bp 的片段和我之前已知部分是一样的
6楼2012-04-12 13:03:17
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