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wycf2013

新虫 (初入文坛)

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[求助] 过大孔树脂分离在放线菌次级代谢产物中的酶抑制剂

我是从放线菌次级代谢产物中筛选酶的抑制剂，现在我想过大孔树脂分离一下，只有强极性的S-8可以吸附，但是没解吸下来东西，我是从水，20%乙醇，40%，60%，80%，100%乙醇梯度洗脱，外加了无水甲醇洗脱，都没有东西。请问各位洗脱剂还有其他的么？水算不算？因为我测抑制活性的时候，好像水洗下来的东西有点抑制作用，其他都没有抑制作用。现在很愁，还在尝试其他树脂，已经有5中舍弃了。

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1楼2012-04-08 09:18:13

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bgtl

新虫 (初入文坛)

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其实美国Union Biometrica 公司出品的COPAS大颗粒流式分选系统可以做酶抑制剂的筛选。主要原理是：首先，将带有淬灭荧光基团(FRAP )的蛋白酶底物多肽连接在微球的一部分结合位点上，然后将需要筛选的抑制剂连接在微球的其它结合位点上，从而建立一个以微球为载体的抑制剂库。将微球与蛋白酶一起孵育，如果抑制剂无效，蛋白酶会将多肽切断，微球产生较强的荧光信号。如果抑制剂效果很强，蛋白酶无法切断多肽，微球没有荧光信号。如果抑制剂无法完全抑制蛋白酶活性，那么仍会有部分多肽被切断，微球会发出较弱的荧光信号。这样就可以利用COPAS大颗粒流式分选系统根据微球荧光信号的强弱对微球进行分选，从而快速找到不同抑制强度的抑制剂。这种技术在筛选抑制剂和优化反应条件方面具有很高的效率和很大的灵活性，可以实现每小时100000个化合物的高速筛选。利用这种技术，荷兰的一个研究小组在数周内找到了胰蛋白酶和多种基质金属蛋白酶的多种抑制剂。