应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 包涵体溶解
51/1返回列表
查看: 2360  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] 包涵体溶解

我的目的蛋白是以包涵体存在的，溶解了半个月了，还是没溶解出来，跑胶后总显示在沉淀里！我该怎么办？
我的溶解方法是：
1、先用PBS和EDTA 洗三次菌体
2、用PBS重新悬浮，加入EDTA和PMSF超声 打3秒停5秒 20min超声的中途还加了EDTA和PMSF
3、4° 10000rpm 10min分开收集上清和沉淀（上清跑后没有目的蛋白）
4、沉淀用PBS和2M 尿素 EDTA 和巯基乙醇、Nacl洗了两次
5、用20ml 8M尿素、EDTA TrisHcl Nacl PMSF 和巯基乙醇溶解了一个半小时！PH在10左右
6、加5ml 磷酸二氢钾和0.5M EDTA 0.02ml 1M Nacl0.5ml 另加水至100ml制成缓冲液II 取10ml加到样品中，室温放置半个小时！
7、12000rpm 4° 15min离心，去上清和沉淀跑胶！结果上清什么都没有，沉淀跑出了目的蛋白！
请问谁可以帮帮我呀！？？急呀！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
qwdr
1楼 2012-04-06 22:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)
各位好友给点建议呀！！！！
赞一下 回复此楼
qwdr
4楼2012-04-08 11:33:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

biowandy

木虫 (正式写手)
★ ★
zhaohq1209: 金币+2, 有帮助，鼓励应助~ 2012-04-08 13:39:13
你加了多少巯基乙醇？不行就加到10mM以上，另外 你在用8M尿素溶解的时候最好超声5-10min，如果这样不行，那应该有点玄乎
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-07 09:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biowandy at 2012-04-07 09:31:04:
你加了多少巯基乙醇？不行就加到10mM以上，另外 你在用8M尿素溶解的时候最好超声5-10min，如果这样不行，那应该有点玄乎

加了1mM的，我试试你的方法啊！谢谢！
赞一下 回复此楼
qwdr
3楼2012-04-07 11:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有帮助，鼓励鼓励 2012-04-08 13:39:27
jamy1989: 金币+5, ★有帮助 2012-04-12 10:47:02
用7M盐酸胍试试。
有些包涵体尿素不能溶解。
赞一下(1人) 回复此楼
静心做事。
5楼2012-04-08 12:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6PrO1XyZ5URF 2026-11-13 3/150 2026-11-15 16:12 by 0aDbZAghdVq9
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:25 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:51 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1Nb0IVlmV6v0 2026-11-11 4/200 2026-11-13 11:18 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 04:21 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:26 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 3/150 2026-11-12 08:26 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 17:03 by TgvkbZZl9tqB
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭