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jamy1989木虫 (小有名气)
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包涵体溶解
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我的目的蛋白是以包涵体存在的，溶解了半个月了，还是没溶解出来，跑胶后总显示在沉淀里！我该怎么办？ 我的溶解方法是： 1、先用PBS和EDTA 洗三次菌体 2、用PBS重新悬浮，加入EDTA和PMSF超声 打3秒停5秒 20min超声的中途还加了EDTA和PMSF 3、4° 10000rpm 10min分开收集上清和沉淀（上清跑后没有目的蛋白） 4、沉淀用PBS和2M 尿素 EDTA 和巯基乙醇、Nacl洗了两次 5、用20ml 8M尿素、EDTA TrisHcl Nacl PMSF 和巯基乙醇溶解了一个半小时！PH在10左右 6、加5ml 磷酸二氢钾和0.5M EDTA 0.02ml 1M Nacl0.5ml 另加水至100ml制成缓冲液II 取10ml加到样品中，室温放置半个小时！ 7、12000rpm 4° 15min离心，去上清和沉淀跑胶！结果上清什么都没有，沉淀跑出了目的蛋白！ 请问谁可以帮帮我呀！？？急呀！！！ |
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