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anxiuhong

新虫 (初入文坛)

[求助] 抗体问题

大家好,最近找公司做了一个抗体,发现抗体显示的带不是我的目的条带,图片上面是SDS-PAGE染色的胶,下面是Westen的片子,点样顺序在图片下方,我的蛋白是拟南芥总蛋白,我的目的带是38kd。想问一下SDS中最亮的那条大约55kD的带是什么东西,并且western检测的条带也大约是55kd的,我觉得就是SDS上的那条最亮的带,请问是抗体不特异造成的吗?还是其他原因?谢谢!

上面:SDS-PAGE  下面:Western blot
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anxiuhong

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by weide12 at 2012-04-06 16:31:48:
你做的是免疫沉淀?还是有好多条带的吗。去除重链可以参考Immunoprecipitation of nitrotyrosine-containing proteins

我做的只是简单的western杂交,提取植物总蛋白,SDS-PAGE检测总蛋白,然后抗体杂交,查看目的蛋白
12楼2012-04-06 19:50:14
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


你在SDS-PAGE 标记一下靶带的位置
2楼2012-04-06 12:35:29
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是抗体重链吧..........
3楼2012-04-06 13:14:47
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
SDS上最亮的死55KD,不是你的靶带了? 这样的话你免疫的蛋白不纯,下面最粗的也是55KD位置蛋白。
4楼2012-04-06 13:32:06
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