应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR
52/1返回列表
查看: 2786  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR

最近做了一次定量PCR标准曲线，用的染料法，做出来之后的结果很不理想，阴性对照荧光值特别高，求各位大侠帮我看看是污染原因还是引物本身的问题，由于本人是新手，对分子生物学实验相当缺乏经验，现在十分迷茫，不知怎么继续，实验结果如下图：

荧光曲线图



溶解峰



溶解曲线
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2012-04-04 16:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 消锦lzhy at 2012-04-04 20:39:37
非常感谢，其实在这之前用同样的引物优化过PCR反应程序，电泳条带很清晰，而且没有非特异性产物，只是有淡淡的引物二聚体条带，所以才试着做的定量，定量产物跑胶也是同样的情况，不过阴性对照也有条带，就是不懂为 ...

你好，问一下，你用普通PCR优化条件模板用的是不是基因组DNA ？
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-07 20:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 有道理！ 2012-04-04 22:25:55
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-04 19:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-04 19:14:47:
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱

非常感谢，其实在这之前用同样的引物优化过PCR反应程序，电泳条带很清晰，而且没有非特异性产物，只是有淡淡的引物二聚体条带，所以才试着做的定量，定量产物跑胶也是同样的情况，不过阴性对照也有条带
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-04 20:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-04 19:14:47:
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱

非常感谢，其实在这之前用同样的引物优化过PCR反应程序，电泳条带很清晰，而且没有非特异性产物，只是有淡淡的引物二聚体条带，所以才试着做的定量，定量产物跑胶也是同样的情况，不过阴性对照也有条带
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-04 20:36:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 299求调剂 +4 kkcoco25 2026-03-02 7/350 2026-03-02 23:11 by kkcoco25
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 7/350 2026-03-02 23:02 by 2103240126
[考研] 化工335求调剂 +4 摸摸猫猫头 2026-03-02 4/200 2026-03-02 22:57 by 向上的胖东
[考研] 调剂 +5 13853210211 2026-03-02 6/300 2026-03-02 22:10 by 无际的草原
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +11 YXCT 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:38 by sunny81
[考研] 285求调剂 +9 满头大汗的学生 2026-02-28 9/450 2026-03-02 20:29 by hypershenger
[考研] 272求调剂 +9 材紫有化 2026-02-28 9/450 2026-03-02 20:22 by hypershenger
[考研] 材料复试调剂 +5 学材料的点 2026-03-01 6/300 2026-03-02 20:01 by hypershenger
[考研] 一志愿中石油（华东）本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 一志愿东北大学材料专硕328，求调剂 +3 shs1083 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:27 by houyaoxu
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 求调剂 +3 熬夜的猫头鹰 2026-03-02 3/150 2026-03-02 11:45 by 刘兵
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭