应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR
52/1返回列表
查看: 2854  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR

最近做了一次定量PCR标准曲线，用的染料法，做出来之后的结果很不理想，阴性对照荧光值特别高，求各位大侠帮我看看是污染原因还是引物本身的问题，由于本人是新手，对分子生物学实验相当缺乏经验，现在十分迷茫，不知怎么继续，实验结果如下图：

荧光曲线图



溶解峰



溶解曲线
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2012-04-04 16:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-04 21:01:33:
阴性有条带的原因可能是引物二聚体，也就是说，引物以自己为模板把自己扩增出来了。所以只要有引物，就会有曲线，无论是什么对照。看你的溶解曲线，不也是有俩峰吗？可能就是二聚体的峰和产物的峰

非常感谢~
回复此楼
11楼2012-04-07 11:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 有道理！ 2012-04-04 22:25:55
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-04 19:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-04 19:14:47:
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱

非常感谢，其实在这之前用同样的引物优化过PCR反应程序，电泳条带很清晰，而且没有非特异性产物，只是有淡淡的引物二聚体条带，所以才试着做的定量，定量产物跑胶也是同样的情况，不过阴性对照也有条带
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-04 20:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

消锦lzhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-04 19:14:47:
从图看来可知道你的体系模板加多了。其次是引物有非特异性扩增或者是二聚体。建议对扩增产物跑胶，同时最好先做下普通PCR摸索条件，做荧光PCR摸索条件太浪费钱

非常感谢，其实在这之前用同样的引物优化过PCR反应程序，电泳条带很清晰，而且没有非特异性产物，只是有淡淡的引物二聚体条带，所以才试着做的定量，定量产物跑胶也是同样的情况，不过阴性对照也有条带
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-04 20:36:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿2110，化学学硕310分，本科重点双非求调剂 +19 努力奋斗112 2026-04-08 19/950 2026-04-12 17:01 by lhj2009
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-06 10/500 2026-04-11 10:36 by 紫曦紫棋
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +9 天下ww 2026-04-09 9/450 2026-04-10 22:58 by Ftglcn90
[考研] 284求调剂 +7 让我上岸吧阿西 2026-04-09 7/350 2026-04-09 18:59 by haironglove
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 274求调剂 +5 山阿蔓 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:28 by 18828373951
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 土木水利专硕276分求调剂 +6 我想上学！！6 2026-04-05 9/450 2026-04-08 17:45 by 宋小宝HQ
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 生物学363调剂求助 +7 fanzhang6666 2026-04-06 9/450 2026-04-07 17:37 by lijunpoly
[考研] 调剂 +4 mcbbc 2026-04-06 5/250 2026-04-07 12:33 by upczlm1989
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭