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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » EDEAE-Sepharose FF层析柱规格 及填料的预处理
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liufuguo

铜虫 (著名写手)

[求助] EDEAE-Sepharose FF层析柱规格 及填料的预处理

大家有做过离子交换层析的么？EDEAE-Sepharose FF说明书上建议的柱子是1*30，而我有个同学也在做，他用的是短粗柱，请问有什么区别？目前实验室只有1*40的柱子，可以用么？另外新买的EDEAE-Sepharose FF该如何处理？之前没做过，求指教，谢谢
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思想者
1楼 2012-04-04 11:23:10
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308630949

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-04 20:50:10
离子柱貌似煮下，抽下真空，然后装好柱后再生下就能用了，好久没用印象也不是太深了，可以看下说明书，用起来比较简单。离子柱上样量和体积有关。柱子小可以少上点样不就OK了
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2楼2012-04-04 15:07:37
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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liufuguo: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-04-22 08:41:25
新买的DEAE的胶应该是在乙醇里边的吧，抽干了，洗洗，有时间的话抽抽气，放到水里就可以装柱子了，当然你直接装也可以，只不过有乙醇压力会大些，得流出去再压柱子，柱子选择的话他建议1*30跟你实际使用是没有关系的，你用1*40的完全没有问题，最好你的柱子有两个柱头，这样可以装的短一些，但是别太短，要有足够的保留时间。
如果你的胶是粉末的话一开始得溶胀
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3楼2012-04-10 16:45:44
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liufuguo

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-10 16:45:44:
新买的DEAE的胶应该是在乙醇里边的吧，抽干了，洗洗，有时间的话抽抽气，放到水里就可以装柱子了，当然你直接装也可以，只不过有乙醇压力会大些，得流出去再压柱子，柱子选择的话他建议1*30跟你实际使用是没有关系 ...

"只不过有乙醇压力会大些，得流出去再压柱子" 没看懂，还要压柱子么？怎么压？ 还有40的装了不到30，上端有一些空气，这样不影响分离效果吧？还有柱填料上方要保留一定量的缓冲液么？目前有3-5cm的缓冲液，还没上样，谢谢
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思想者
4楼2012-04-10 17:38:42
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by liufuguo at 2012-04-10 17:38:42:
"只不过有乙醇压力会大些，得流出去再压柱子" 没看懂，还要压柱子么？怎么压？ 还有40的装了不到30，上端有一些空气，这样不影响分离效果吧？还有柱填料上方要保留一定量的缓冲液么？目前有3-5cm的缓冲 ...

当然不能留有距离了，一定会影响分离效果的，除非你样品量很大可能还能忽略，压柱子一定会比不压好很多，结合也会好些，至于流速的话用你说明书上的线速度乘以柱子横截面积就行了，压到了把柱头拧到那里；另外你买的胶有可能是在20%乙醇里的，你要是压柱子得用水压，所以得走个柱体积排出去
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liufuguo
5楼2012-04-11 09:05:25
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liufuguo

铜虫 (著名写手)
送鲜花一朵
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5楼: Originally posted by mssj300130 at 2012-04-11 09:05:25:
当然不能留有距离了，一定会影响分离效果的，除非你样品量很大可能还能忽略，压柱子一定会比不压好很多，结合也会好些，至于流速的话用你说明书上的线速度乘以柱子横截面积就行了，压到了把柱头拧到那里；另外你 ...

请问压柱子具体怎么压，谢谢
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思想者
6楼2012-04-11 10:07:06
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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liufuguo: 金币+5, ★有帮助 2012-04-22 08:41:41
引用回帖:
6楼: Originally posted by liufuguo at 2012-04-11 10:07:06:
请问压柱子具体怎么压，谢谢

压柱子用蠕动泵或者AKTA
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7楼2012-04-11 16:11:49
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