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zhangyep121

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助各位老师师兄师姐同学们

请问怎样用限制性内切酶将pBR322或者pUC18变成线型，本人是这方面小白，不知道具体操作如何，还请各位不吝赐教（希望有具体步骤，有相关文献也很感谢）
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1楼 2012-03-29 09:41:36
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangyep121: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您 2012-03-29 19:01:22
首选选择酶切位点（用什么酶切），配制酶切反应体系（参照限制性内切酶的使用说明书），加入质粒，37度保温就可以了
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2楼2012-03-29 11:01:27
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 授人以渔，很好！ 2012-03-29 17:25:03
zhangyep121: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常谢谢您，我去试试 2012-03-29 19:03:03
zhangyep121: 金币+5 2012-04-06 09:35:02
嗯.............
不能直接告诉你，会让人变懒，你要自己学习哦
1. 先找质粒图谱，找到自己手头有的内切酶且在图谱上有酶切位点
2. 选择有单一酶切位点的，多个酶切位点的会把质粒搞断的
3. 选择正规厂家正品并且好切的酶，我们一般用NEB的四大常用酶：Hind IIII/BamH I/EcoR I/Xba I
4. 选择好体系，参照说明书配好体系，尽量酶切过夜，什么省时酶切，5min搞定都是商家的宣传......如果急需，最少也要酶切3 hr以上
5. 跑电泳，确定酶切效果
希望实验顺利
若有说错，希望高手指正
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Let God do with it as He wills
3楼2012-03-29 13:16:00
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