| 查看: 1655 | 回复: 3 | ||||
[交流]
常用酶的配制 已有3人参与
|
|
实验步骤 1．溶菌酶 用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2．蛋白水解酶类 a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。 c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2 结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2 ，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2 的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2 而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2 。 3．无DNA酶的RNA酶 将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。 来源：everllab实验管理 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 ChIP |
» 猜你喜欢
08工学调剂
已经有11人回复
-
350求调剂
已经有6人回复
-
求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601）
已经有4人回复
-
一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂
已经有6人回复
-
接收2026硕士调剂(学硕+专硕)
已经有6人回复
-
081700 调剂 267分
已经有5人回复
-
328求调剂
已经有4人回复
-
0854 考研调剂 招生了！AI 方向
已经有14人回复
-
招08考数学
已经有14人回复
-
一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 怎么配制2%的溶菌酶溶液
已经有12人回复
- 纤维素酶和果胶酶如何配制溶液
已经有21人回复
- 请问食品中常用的酶制剂有哪些，还有主要应用在哪呢？
已经有5人回复
- 溶菌酶缓冲液配制，急急急！
已经有3人回复
- Dnase 1，Rnase A和蛋白酶K的配制
已经有4人回复
- 凝血酶溶液的配制及适配体传感器
已经有9人回复
- 两个月前配制的普鲁兰酶，在冰箱中储存。。。现在还能否使用
已经有2人回复
- 【求助/交流】请问，酶溶液的配制方法！
已经有10人回复
- 【求助/交流】急，请求高人指点，实验用乳酸脱氢酶稀释液怎么配制？
已经有5人回复
- 【求助】纤维素酶水溶液的配制方法
已经有8人回复
- 【求助】蛋白酶K溶液的配制
已经有7人回复
- 【求助/交流】弹性蛋白酶（Elastase）溶液的配制及其作用底物
已经有8人回复
- 【讨论】ACE酶配制后如何保存
已经有12人回复
- 生物酶溶液的配制及注意事项
已经有4人回复
- 【求助/交流】【土壤酶】蔗糖酶测定方法中苯甲酸的配制
已经有15人回复
2楼2013-06-13 21:27:40
119904386
铁虫 (小有名气)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 1120.3
- 散金: 110
- 红花: 2
- 帖子: 82
- 在线: 72.4小时
- 虫号: 1049516
- 注册: 2010-06-29
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
3楼2013-06-14 11:30:24
4楼2016-07-12 14:38:19
5