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绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 做酵母双杂交的请出来指导一下,谢谢!已有1人参与

本人最近在用Gateway方法做酵母双杂交,用的是英俊的ProQuest™ Two-Hybrid System试剂盒,用带attB的引物PCR后连接pDONR载体,转化卡那平板,长的不少的菌,但是提质粒验证全是为插入的,不知道怎么回事?请求你的帮助与指导,谢谢!
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路漫漫其修远兮,吾将上下而求索!
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新虫 (初入文坛)

引物是不是不合理呀!可以做酶切验证,但一定要切一下质粒,质粒上也有BsrG1的酶切位点,可以作比较
魏俊燕
2楼2015-01-04 19:50:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

同意楼上观点,看看是不是没用对引物,B site有好几种。你转化的什么菌?在BP反应中,需要有足够的载体和PCR产物,我的经验两者都最好有100 ng以上。反应时间也可以适当延长,室温过夜吧。另外,原始载体是随试剂盒带的么?最好也酶切验证一下。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2015-01-04 22:09:07
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