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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做酵母双杂交的请出来指导一下，谢谢！
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绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 做酵母双杂交的请出来指导一下，谢谢！ 已有1人参与

本人最近在用Gateway方法做酵母双杂交，用的是英俊的ProQuest™ Two-Hybrid System试剂盒，用带attB的引物PCR后连接pDONR载体，转化卡那平板，长的不少的菌，但是提质粒验证全是为插入的，不知道怎么回事？请求你的帮助与指导，谢谢！
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
1楼 2012-03-22 20:39:16
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13569707191

新虫 (初入文坛)
引物是不是不合理呀！可以做酶切验证，但一定要切一下质粒，质粒上也有BsrG1的酶切位点，可以作比较
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魏俊燕
2楼2015-01-04 19:50:54
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

同意楼上观点，看看是不是没用对引物，B site有好几种。你转化的什么菌？在BP反应中，需要有足够的载体和PCR产物，我的经验两者都最好有100 ng以上。反应时间也可以适当延长，室温过夜吧。另外，原始载体是随试剂盒带的么？最好也酶切验证一下。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2015-01-04 22:09:07
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