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w408912472

木虫 (正式写手)

[求助] RNA保护剂

小弟在做RNA荧光的实验,但是感觉RNA在溶液中很快就被切掉,想咨询下除了器具灭菌以及使用RNAse-free的水外,还有什么可以减少RNA酶的干扰。能不能在溶液中加入抑制剂,加入什么抑制剂,多少量?有参考文献最好。我没做提取,提取好像加一种异硫氰酸胍,4M,我感觉好大,貌似不合适,不知道加少一点有没有效果……
请大侠指点!
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

尿素  我在跑变性胶使用过

SDS主要破坏蛋白质分子间的共价键,使蛋白质变性而改变原有的构象


RVC(氧钒核糖核苷复合物)是一种能抑制多种RNase活性的过渡态化合物, 适用于加入到RNA提取, FISH和Microdissection等缓冲液中保护RNA分子的完整性。  我老板的书里有介绍,但我没用
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
8楼2012-03-20 09:56:25
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普通回帖

shaquila

金虫 (正式写手)

rna酶抑制剂,fermantas有卖
2楼2012-03-19 21:56:55
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
w408912472: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2012-03-24 16:10:04
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂,用的体系较小,可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方,用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
3楼2012-03-20 09:16:12
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w408912472

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-20 09:16:12:
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂,用的体系较小,可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方,用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640

这个溶液太复杂,单单加个异硫氰酸胍100-200mM有没有用?我只要能维持个几小时就可以了!我希望加入的是简单点的配方,另外不要影响RNA与他的适配体结合。
4楼2012-03-20 09:27:00
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w408912472

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-20 09:16:12:
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂,用的体系较小,可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方,用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640

不想加酶,能不能给我介绍下这几个试剂的用法,以及效果。
氧钒核糖核苷复合物、SDS、尿素、硅、藻土、焦磷酸二乙酯异硫氰酸胍。我希望加入简单的试剂,能保护几个小时就行了。
另外请教一下,RNAse是不是一定要在先用depc浸泡,然后180°C烘6个小时。没有泡depc,只在130°C高压灭菌30分钟行不行
5楼2012-03-20 09:33:22
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

我没用他这个配方配过这个东西,
但从网上或以前老板也讲过保护的主要有异硫氰酸胍和DEPC,其他的是调节PH什么的,用这个应该可以,浓度可能你的试试看

另异硫氰酸胍是一种蛋白质强变性剂,能所以够有效的抑制RNA酶的活性。你说要看结合,不知道会不会有影响
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6楼2012-03-20 09:40:34
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

“没有泡depc,只在130°C高压灭菌30分钟行不行”

如果是玻璃的,可以烤180°C烘6个小时,不泡也可先以,但一定要过酸洗干净,最好是泡泡。
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
7楼2012-03-20 09:43:32
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
telomerase: 金币+2, 欢迎新虫!!!谢谢你的热心应助!! 2012-03-20 10:53:35
w408912472: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-03-24 16:10:27
感觉楼上的比较靠谱,但是,就针对你的实验来说,最重要的是要不能影响结果,像H2O2、sds、depc、Triozl、尿素、异硫氰酸胍,都是比较经典的RNase变性剂,我建议你可以试下像H2O2
Tobeornottobe,that'saproblem
9楼2012-03-20 10:18:56
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有卖的呀   我知道康维公司就有卖保存RNA的
快乐奋斗,创造所有。
10楼2012-03-20 17:13:38
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