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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNA保护剂
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w408912472

木虫 (正式写手)

[求助] RNA保护剂

小弟在做RNA荧光的实验，但是感觉RNA在溶液中很快就被切掉，想咨询下除了器具灭菌以及使用RNAse-free的水外，还有什么可以减少RNA酶的干扰。能不能在溶液中加入抑制剂，加入什么抑制剂，多少量？有参考文献最好。我没做提取，提取好像加一种异硫氰酸胍，4M，我感觉好大，貌似不合适，不知道加少一点有没有效果……
请大侠指点！
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1楼 2012-03-19 19:24:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
尿素  我在跑变性胶使用过

SDS主要破坏蛋白质分子间的共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象


RVC(氧钒核糖核苷复合物)是一种能抑制多种RNase活性的过渡态化合物, 适用于加入到RNA提取, FISH和Microdissection等缓冲液中保护RNA分子的完整性。  我老板的书里有介绍，但我没用
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
8楼2012-03-20 09:56:25
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普通回帖

shaquila

金虫 (正式写手)
rna酶抑制剂，fermantas有卖
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2楼2012-03-19 21:56:55
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
w408912472: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2012-03-24 16:10:04
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂，用的体系较小，可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方，用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640
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3楼2012-03-20 09:16:12
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w408912472

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-20 09:16:12:
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂，用的体系较小，可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方，用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640

这个溶液太复杂，单单加个异硫氰酸胍100-200mM有没有用？我只要能维持个几小时就可以了!我希望加入的是简单点的配方，另外不要影响RNA与他的适配体结合。
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4楼2012-03-20 09:27:00
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w408912472

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by telomerase at 2012-03-20 09:16:12:
2楼说的是rt时的RNase的抑制剂，用的体系较小，可能用量会大。要买的话很多公司有卖。

下面是论坛里Trizol的配方，用他这个应该会好些
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4125640

不想加酶，能不能给我介绍下这几个试剂的用法，以及效果。
氧钒核糖核苷复合物、SDS、尿素、硅、藻土、焦磷酸二乙酯异硫氰酸胍。我希望加入简单的试剂，能保护几个小时就行了。
另外请教一下，RNAse是不是一定要在先用depc浸泡，然后180°C烘6个小时。没有泡depc，只在130°C高压灭菌30分钟行不行
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5楼2012-03-20 09:33:22
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
我没用他这个配方配过这个东西，
但从网上或以前老板也讲过保护的主要有异硫氰酸胍和DEPC，其他的是调节PH什么的，用这个应该可以，浓度可能你的试试看

另异硫氰酸胍是一种蛋白质强变性剂，能所以够有效的抑制RNA酶的活性。你说要看结合，不知道会不会有影响
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6楼2012-03-20 09:40:34
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
“没有泡depc，只在130°C高压灭菌30分钟行不行”

如果是玻璃的，可以烤180°C烘6个小时，不泡也可先以，但一定要过酸洗干净，最好是泡泡。
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7楼2012-03-20 09:43:32
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niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
telomerase: 金币+2, 欢迎新虫！！！谢谢你的热心应助！！ 2012-03-20 10:53:35
w408912472: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-03-24 16:10:27
感觉楼上的比较靠谱，但是，就针对你的实验来说，最重要的是要不能影响结果，像H2O2、sds、depc、Triozl、尿素、异硫氰酸胍，都是比较经典的RNase变性剂，我建议你可以试下像H2O2
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Tobeornottobe,that'saproblem
9楼2012-03-20 10:18:56
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有卖的呀   我知道康维公司就有卖保存RNA的
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快乐奋斗，创造所有。
10楼2012-03-20 17:13:38
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