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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR时出现了非目的片段的超大片段条带
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
如果是从基因组里克隆已知基因片段，只要引物没错，扩增条件合适，一定能扩增出来。如果是鉴定是否具有插入片段，你的胶上没有一个有目的片段。
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11楼2012-03-19 09:58:36
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zhcosa

金虫 (小有名气)
是基因组DNA吧，没有目的带。稀释一下。
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12楼2012-03-19 10:32:04
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feier5168

金虫 (小有名气)
我觉得你这是模板条带吧。
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奋斗啊
13楼2012-03-19 11:54:43
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hdengmin

木虫 (著名写手)
个人觉得延伸时间没必要延长，我们实验室taq酶的延伸速度是2k/min，建议楼主将延伸的温度跑个梯度，模板也可试试梯度，确定最适浓度，还有就是引物二聚体挺亮的。
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14楼2012-03-19 21:37:48
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我叫路人甲

银虫 (小有名气)
模板吧？？？
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15楼2012-03-21 01:04:02
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yunbfly

木虫 (小有名气)
确定是不是模板，电泳时点上同等量的模板做个对照就知道了。
不过，我之前也出现过也很不好扩、不稳定的案例：2条带，一条目的长度，一条非目的长度，全部测序发现，意外发现另一个长度条带也是同一个基因，只是上游调控序列短了许多。
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16楼2012-03-21 08:57:07
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)
我觉得除了模板浓度的问题，可能造成模板在电泳图中显示。另外，我觉得引物是不是设计的合理。同样的引物，有两个作用模板也会出现上面的情况。大片段的合成慢，小片段合成速度快，在同样的时间里，小片段合成的浓度就大，电泳出来亮度就高
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17楼2012-06-29 12:04:21
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