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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)

如果是从基因组里克隆已知基因片段,只要引物没错,扩增条件合适,一定能扩增出来。如果是鉴定是否具有插入片段,你的胶上没有一个有目的片段。
11楼2012-03-19 09:58:36
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zhcosa

金虫 (小有名气)

是基因组DNA吧,没有目的带。稀释一下。
12楼2012-03-19 10:32:04
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feier5168

金虫 (小有名气)

我觉得你这是模板条带吧。
奋斗啊
13楼2012-03-19 11:54:43
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hdengmin

木虫 (著名写手)

个人觉得延伸时间没必要延长,我们实验室taq酶的延伸速度是2k/min,建议楼主将延伸的温度跑个梯度,模板也可试试梯度,确定最适浓度,还有就是引物二聚体挺亮的。
14楼2012-03-19 21:37:48
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我叫路人甲

银虫 (小有名气)

模板吧???
15楼2012-03-21 01:04:02
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yunbfly

木虫 (小有名气)

确定是不是模板,电泳时点上同等量的模板做个对照就知道了。
不过,我之前也出现过也很不好扩、不稳定的案例:2条带,一条目的长度,一条非目的长度,全部测序发现,意外发现另一个长度条带也是同一个基因,只是上游调控序列短了许多。
16楼2012-03-21 08:57:07
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

我觉得除了模板浓度的问题,可能造成模板在电泳图中显示。另外,我觉得引物是不是设计的合理。同样的引物,有两个作用模板也会出现上面的情况。大片段的合成慢,小片段合成速度快,在同样的时间里,小片段合成的浓度就大,电泳出来亮度就高
17楼2012-06-29 12:04:21
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