24小时热门版块排行榜    

查看: 2708  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

恶魔眼球

木虫 (小有名气)

[求助] PCR时出现了非目的片段的超大片段条带

最近做pcr一直不出结果,竟然出现了非目的片段的超大片段条带,怎么办呢。PS:我们的反应体系是20uL的:ddwater 13.7uL,buffer 2.0uL,引物各1.0uL(10uM),dNTP0.8uL,Taq 酶0.5uL(2U/uL),模板1uL;反应过程:95° 5min,(94°  40s,59°  50s, 72°  50s)35cycles,72°  10min;目的条带是1570bp的;假期前按照上述体系有结果的,只是送去测序的时候,浓度太低没有测出来。现在重新测,一样的东西,却没有结果了。各位大虾,请指点迷津~~

marker 是DL2000,最亮的ladder是750bp
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feier5168

金虫 (小有名气)

我觉得你这是模板条带吧。
奋斗啊
13楼2012-03-19 11:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流! 2012-03-18 20:06:19
你的模板是啥?提取的基因组DNA,稀释过么?浓度多少?
2楼2012-03-18 15:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔眼球

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-03-18 15:16:21:
你的模板是啥?提取的基因组DNA,稀释过么?浓度多少?

对,是基因组DNA。浓度是50 ng/μL。
3楼2012-03-18 17:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极应助! 2012-03-18 20:06:27
恶魔眼球: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-19 09:39:39
Taq酶的扩增速度一般是每分钟1kb,你产物有1.5kb,至少要用1分30秒的延伸时间啊。另外退火温度稍微高了点(相对一般程序),现在扩增不出来,我建议你试试55℃。
你跑电泳检测时上了几微升的样啊?你说的超大条带,我觉得是模板。
4楼2012-03-18 18:05:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 和导师撕破脸了 +19 圆满123456 2024-11-13 23/1150 2024-11-16 23:59 by 一捧江山在掌握
[论文投稿] 投NP和NC +3 seesunburst 2024-11-16 3/150 2024-11-16 23:34 by nono2009
[论文投稿] 为什么小修又是送审 +6 woshichuxuan 2024-11-16 8/400 2024-11-16 23:33 by nono2009
[论文投稿] 国内期刊审稿人数量 +4 新时代核动力驴 2024-11-13 7/350 2024-11-16 23:27 by 新时代核动力驴
[考博] 联系的博导说有时间聊一聊 我回复了自己可以的时间后 博导就没再回复 +8 evan0489 2024-11-15 8/400 2024-11-16 23:00 by 闲云雅鹤
[硕博家园] reject后小感 +7 sioc-sunj 2024-11-14 9/450 2024-11-16 20:49 by zyhou
[考博] 随缘读博 一篇中科院一区Top 一篇中科院二区Top 两篇专利 +7 Ricoch4t 2024-11-13 16/800 2024-11-16 18:49 by 千重稻菽浪
[考博] 中南大学 粉末冶金国家重点实验室 陈超教授课题组拟招收 1~2位博士研究生通知 +8 中南大学-金属材 2024-11-14 20/1000 2024-11-16 18:45 by 中南大学-金属材
[基金申请] 求助!请问海外博后依托内地单位申请青基的优劣? 50+3 2280999712 2024-11-15 14/700 2024-11-16 17:30 by dxcharlary
[论文投稿] 找不到审稿人 +7 吉祥如意141913 2024-11-13 7/350 2024-11-16 15:09 by 羊驼22
[硕博家园] 实验进度 +10 麻辣烫。 2024-11-11 15/750 2024-11-16 13:49 by machunyude
[论文投稿] 论文返修状态变成了awaiting AE recommendation 10+4 猪小耍 2024-11-13 15/750 2024-11-16 09:24 by guxue
[论文投稿] chemical science和advanced science哪个好一点 +6 yly150 2024-11-12 6/300 2024-11-15 21:06 by hcj9909053
[基金申请] 求助 +4 Enenenene 2024-11-15 4/200 2024-11-15 09:36 by 榨菜拌青椒
[基金申请] 博后基金分组排名 +7 攻城2025 2024-11-14 7/350 2024-11-14 21:19 by 实验小白ha
[硕博家园] 研究生的生活该是什么样 +4 lqy0719 2024-11-14 4/200 2024-11-14 16:45 by 阿荣喝酒
[教师之家] 处在人生职业的分水岭 +4 otani 2024-11-13 4/200 2024-11-14 14:17 by mddzwo
[基金申请] 博后面上出结果了 +5 wl87925139 2024-11-14 5/250 2024-11-14 10:26 by kingmax18996
[基金申请] 第76批博士后面上大概什么时间公示 +6 探际者 2024-11-11 7/350 2024-11-14 10:06 by Foxicut88
[论文投稿] 论文接受后,编辑部发邮件提醒缺少附件 15+4 上善若水明泪 2024-11-10 4/200 2024-11-12 14:24 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见