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jingzixy新虫 (小有名气)
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关于细菌细胞壁、细胞膜的染色
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| 想想大家请教一下细菌的细胞壁、细胞膜的染色问题,细菌细胞壁、细胞膜染色都有那些方法?革兰氏阳性菌细胞膜染色有人做过吗? |
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zdx516
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jingzixy: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-22 19:56:19
zhang8826857: 金币+4, good 2012-03-22 22:20:48
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细菌细胞壁染色 一、基本原理 细菌细胞壁很薄,革兰氏阳性菌的细胞壁为20—30nm,革兰氏阴性菌的细胞壁为10—13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖,它与染料结合的能力差,不易着色,在细菌的染色过程中,一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞,细胞壁本身并未染色,因此,欲通过染色来观察细胞壁,必须设法使细胞壁能着色,而细胞质则不易着色,常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用,它们使细胞壁形成可着色的复合物,而使细胞质不易被着色,经结晶紫或甲基绿染色后,便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。 根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后,会产生质壁分离这一现象,经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。 二、器材 巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium),枯草芽孢杆菌; 0.2%结晶紫水溶液,5%单宁酸(鞣酸)水溶液,1%磷钼酸水溶液,1%甲基绿水溶液,25%NaCl水溶液,0.01%结晶紫水溶液,Bouin氏固定液,0.1%硫堇(thionine)水溶液,乙醚,乙醚蒸气瓶等。 三、操作步骤 1.单宁酸法 (1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。 (2)用5%单宁酸染5分钟后,水洗。 (3)用0.2%结晶紫染3—5分钟,水洗,吹干。用油镜观察,细胞壁呈紫色,细胞质呈淡紫色。 2.磷钼酸法 (1)制备浓厚的涂片,在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3—5分钟。 (2)用1%甲基绿水溶液染3—5分钟。 (3)水洗后,吹干,用油镜观察。细胞壁为绿色,细胞质无色。 |
2楼2012-03-21 16:09:29
jingzixy
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