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jingzixy新虫 (小有名气)
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关于细菌细胞壁、细胞膜的染色
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| 想想大家请教一下细菌的细胞壁、细胞膜的染色问题，细菌细胞壁、细胞膜染色都有那些方法？革兰氏阳性菌细胞膜染色有人做过吗？ |
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zdx516
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zhang8826857: 金币+4, good 2012-03-22 22:20:48
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细菌细胞壁染色 一、基本原理 细菌细胞壁很薄，革兰氏阳性菌的细胞壁为20—30nm，革兰氏阴性菌的细胞壁为10—13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞，细胞壁本身并未染色，因此，欲通过染色来观察细胞壁，必须设法使细胞壁能着色，而细胞质则不易着色，常用的方法有单宁酸法和磷钼酸法。单宁酸和磷钼酸都是起媒染作用，它们使细胞壁形成可着色的复合物，而使细胞质不易被着色，经结晶紫或甲基绿染色后，便可在普通光学显微镜下观察到细胞壁。 根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。 二、器材 巨大芽孢杆菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢杆菌； 0．2％结晶紫水溶液，5％单宁酸（鞣酸）水溶液，1％磷钼酸水溶液，1％甲基绿水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％结晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，乙醚，乙醚蒸气瓶等。 三、操作步骤 1．单宁酸法 (1)将培养16—18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。 (2)用5％单宁酸染5分钟后，水洗。 (3)用0．2％结晶紫染3—5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。 2．磷钼酸法 (1)制备浓厚的涂片，在未干时浸入1％磷钼酸水溶液3—5分钟。 (2)用1％甲基绿水溶液染3—5分钟。 (3)水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。 |
2楼2012-03-21 16:09:29
jingzixy
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