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云琪

新虫 (小有名气)

[求助] 光吸收值是产物的还是底物的

漆酶:5 mL 反应体系中,加入 3.6 mL(0.219mol/L) pH4.5 醋酸缓冲液,400 μL 0.01 mmol/L 愈创木酚,1 mL 粗酶液,充分混匀后,30℃准确反应 30 min,冰浴终止反应,立即在 465 nm 处比色,测定反应30 min 内酶活的变化,以热灭活酶液做对照。每分钟每 μmol 愈创木酚被氧化所需的酶量为一个活力单位(U)。酶活的计算公式:酶活力=(稀释倍数×OD 值)/(12100×30×V/10^ 6)(木酶ZF-2)

锰过氧化物酶锰依赖过氧化物酶(Manganese-dependent per-oxidases, MnPs):反应体系中含50 mmol/L (0.219mol/L)pH4.5的乳酸钠缓冲液3.4 mL,1.6 mmol/L的硫酸锰溶液0.1 mL,粗酶液0.4mL。37℃水浴两分钟后加入1.6 mmol/L的H2O20.1 mL,启动反应.室温下240 nm处测反应4 min时OD改变值.酶活定义为: 1个酶活力单位用每分钟吸光值增加0.1的酶量来表示。。(梁振普加邱爱连)

木素过氧化物酶:以LiP在H2O2存在下氧化Azure B染料来表示LiP活力的方法125 mmol/L(100mol/L柠檬酸缓冲液)的酒石酸钠缓冲液(pH 3.0)1 mL,0.160 mmol/L的Azure B溶液500μL,培养基滤出液500μL,30℃下加入2 mmol/L的H2O2溶液500μL启动反应,测反应最初3 min内651 nm处OD值减小速率,1个酶活力单位以每分钟每毫升的培养基滤出液降低0.1个OD值来表示。
各位虫友,最近在做木质素酶的酶活测定,遇到一些麻烦呀。以以上的方法。在漆酶测定中的465nm的测定是愈创木酚的吸收波长还是一它为底物产物的吸收波长
锰过氧化物酶:240nm二价锰离子的吸收波长还是其产物的吸收波长
木素过氧化物酶:651nm甲苯胺蓝的的吸收波长还是其产物的吸收波长
感谢你的赐教
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每天进步一点点!
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Vicky?香

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 云琪 at 2013-03-31 23:06:16
你是做紫外分光光度计测嘛?建议用石英比色皿,有条件多做几个重复。对照应该用发酵液的或则是灭活的酶液。多于漆酶说说吧!要是用愈创木酚的话,在终止反应时不能热灭活的。
希望能帮到你,当时我做的时候也是焦 ...

请问你做出来了吗?能讲讲怎么做的吗?

发自小木虫Android客户端
13楼2018-03-09 20:37:09
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ly767663894

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
LiP酶是底物浓度的降低,MnP酶是产物浓度的增加,Lac酶一般都是采用ABTS做的
2楼2012-03-17 09:31:36
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lmy0459

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
根据我以前实验的经验,应该是产物的。
3楼2012-03-18 20:36:01
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云琪

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ly767663894 at 2012-03-17 09:31:36:
LiP酶是底物浓度的降低,MnP酶是产物浓度的增加,Lac酶一般都是采用ABTS做的

感谢了!你的回复给予我很大的帮助。请问你:你在做Lip、Mnp的时候药品中是不是有一些需要现配的呀?你能教导怎样配置50mmol/L的乳酸缓冲液、125mmol/lL的柠檬酸缓冲液嘛?
每天进步一点点!
4楼2012-03-19 07:02:54
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