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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液？
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静静1434

金虫 (初入文坛)

[求助] 怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液？

请问怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液？用于半数致死量实验的。谢谢！
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1楼2012-03-10 16:02:31
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841790061

银虫 (著名写手)

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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-03-12 18:19:34
你应该算出1.8X10^9cfu/ml，再加无菌水稀释到目标浓度即可，配制好多久要看你是用什么配制菌液的及相应菌的生理性质。
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加油！我是流氓我怕谁！
4楼2012-03-11 18:16:23
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ybfang

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 静静1434 at 2012-03-13 20:17:05:
那你是怎么确定浓度的？如果平板计数的话需要一天时间，那之后菌活力都不行了吧？

菌液稀释后，涂板，16~24小时后计菌落数就可以推算出浓度了，其实知道数量级多少就可以了，一般不用那么精准的。菌的活力会受影响但不大，建议知道浓度后立即进入下一步。对了，什么叫攻毒
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11楼2012-03-14 00:58:47
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ybfang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 静静1434 at 2012-03-14 09:22:18:
哦。。就是上动物实验哈。。呵呵。。那你是用生理盐水稀释么？我用生理盐水稀释菌一天就死了。。

死了？我是用生理盐水。做的是海水弧菌的。你用无菌蒸馏水试试吧。用吸光度也是一个方法，做个曲线
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14楼2012-03-14 23:46:20
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fushaoming

金虫 (初入文坛)
可以用麦氏比浊法，上网查下可以知道怎么配置，主要是利用反应生成硫酸钡做标准曲线，相应的对应菌体浓度。需要用到分光光度计，菌体可以离心后溶到生理盐水中，稀释到标准范围内。
或者用到细菌计数板，相差显微镜观察。
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16楼2012-03-19 23:34:55
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ybfang

木虫 (小有名气)

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zhang8826857(金币+1): gl 2012-03-11 09:37:03
用试管稀释法。稀释10倍、100倍、1000倍...然后涂布计数做组平行，取菌落50~300左右的，然后可以推算出其他浓度的
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2楼2012-03-10 23:11:13
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静静1434

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by ybfang at 2012-03-10 23:11:13:
用试管稀释法。稀释10倍、100倍、1000倍...然后涂布计数做组平行，取菌落50~300左右的，然后可以推算出其他浓度的

嗯。我就是这样做的。但如果算出来为1.8X10^9cfu/ml，这样怎么调整呢？而且配制好后能保存多久呢？谢谢
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3楼2012-03-11 12:26:36
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静静1434

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 841790061 at 2012-03-11 18:16:23:
你应该算出1.8X10^9cfu/ml，再加无菌水稀释到目标浓度即可，配制好多久要看你是用什么配制菌液的及相应菌的生理性质。

哦。。我用的沙门氏菌，菌液用来攻毒的，能不能直接用肉汤培养的来攻毒呢？还是必须用生理盐水？用生理盐水稀释的好像不能保存多久，我前一天稀释的，第二天又平板计数就不长菌了。。
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5楼2012-03-12 14:28:01
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841790061

银虫 (著名写手)
对于菌液攻毒这方面我不懂，呵呵！
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加油！我是流氓我怕谁！
6楼2012-03-12 16:53:55
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ybfang

木虫 (小有名气)
什么叫菌液攻毒？我现在在做的是抑菌实验，配制后确定浓度后即用了，不要长久保存。
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7楼2012-03-12 22:35:18
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静静1434

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 841790061 at 2012-03-12 16:53:55:
对于菌液攻毒这方面我不懂，呵呵！

哦。。。还是非常感谢哈。。
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8楼2012-03-13 20:16:01
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静静1434

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by ybfang at 2012-03-12 22:35:18:
什么叫菌液攻毒？我现在在做的是抑菌实验，配制后确定浓度后即用了，不要长久保存。

那你是怎么确定浓度的？如果平板计数的话需要一天时间，那之后菌活力都不行了吧？
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9楼2012-03-13 20:17:05
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skull123

木虫 (正式写手)

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静静1434(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-14 09:26:01
可以考虑用吸光度来测量，先测出样品二倍稀释下的不同吸光度，同时每次稀释后的样本用平板计数，这样可以大致得出一个关系图，然后下次直接用无菌生理盐水慢慢稀释到那个吸光度范围就可以了，而且细菌溶度本身就是个不太精准的，1X10^9cfu/ml肯定不可能一定是这个数，都上亿了，或多或少都会有差异，但是一般不会影响太大，所以，，，，
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10楼2012-03-13 23:42:04
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