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静静1434

金虫 (初入文坛)

[求助] 怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液?

请问怎样配制1X10^9cfu/ml沙门氏菌悬液?用于半数致死量实验的。谢谢!
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841790061

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-03-12 18:19:34
你应该算出1.8X10^9cfu/ml,再加无菌水稀释到目标浓度即可,配制好多久要看你是用什么配制菌液的及相应菌的生理性质。
加油!我是流氓我怕谁!
4楼2012-03-11 18:16:23
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ybfang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 静静1434 at 2012-03-13 20:17:05:
那你是怎么确定浓度的?如果平板计数的话需要一天时间,那之后菌活力都不行了吧?

菌液稀释后,涂板,16~24小时后计菌落数就可以推算出浓度了,其实知道数量级多少就可以了,一般不用那么精准的。菌的活力会受影响但不大,建议知道浓度后立即进入下一步。对了,什么叫攻毒
共勉!!!!
11楼2012-03-14 00:58:47
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ybfang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 静静1434 at 2012-03-14 09:22:18:
哦。。就是上动物实验哈。。呵呵。。那你是用生理盐水稀释么?我用生理盐水稀释菌一天就死了。。

死了?我是用生理盐水。做的是海水弧菌的。你用无菌蒸馏水试试吧。用吸光度也是一个方法,做个曲线
共勉!!!!
14楼2012-03-14 23:46:20
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fushaoming

金虫 (初入文坛)

可以用麦氏比浊法,上网查下可以知道怎么配置,主要是利用反应生成硫酸钡做标准曲线,相应的对应菌体浓度。需要用到分光光度计,菌体可以离心后溶到生理盐水中,稀释到标准范围内。
或者用到细菌计数板,相差显微镜观察。
16楼2012-03-19 23:34:55
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普通回帖

ybfang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): gl 2012-03-11 09:37:03
用试管稀释法。稀释10倍、100倍、1000倍...然后涂布计数做组平行,取菌落50~300左右的,然后可以推算出其他浓度的
共勉!!!!
2楼2012-03-10 23:11:13
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静静1434

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by ybfang at 2012-03-10 23:11:13:
用试管稀释法。稀释10倍、100倍、1000倍...然后涂布计数做组平行,取菌落50~300左右的,然后可以推算出其他浓度的

嗯。我就是这样做的。但如果算出来为1.8X10^9cfu/ml,这样怎么调整呢?而且配制好后能保存多久呢?谢谢
3楼2012-03-11 12:26:36
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静静1434

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 841790061 at 2012-03-11 18:16:23:
你应该算出1.8X10^9cfu/ml,再加无菌水稀释到目标浓度即可,配制好多久要看你是用什么配制菌液的及相应菌的生理性质。

哦。。我用的沙门氏菌,菌液用来攻毒的,能不能直接用肉汤培养的来攻毒呢?还是必须用生理盐水?用生理盐水稀释的好像不能保存多久,我前一天稀释的,第二天又平板计数就不长菌了。。
5楼2012-03-12 14:28:01
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841790061

银虫 (著名写手)

对于菌液攻毒这方面我不懂,呵呵!
加油!我是流氓我怕谁!
6楼2012-03-12 16:53:55
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ybfang

木虫 (小有名气)

什么叫菌液攻毒?我现在在做的是抑菌实验,配制后确定浓度后即用了,不要长久保存。
共勉!!!!
7楼2012-03-12 22:35:18
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静静1434

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 841790061 at 2012-03-12 16:53:55:
对于菌液攻毒这方面我不懂,呵呵!

哦。。。还是非常感谢哈。。
8楼2012-03-13 20:16:01
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静静1434

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by ybfang at 2012-03-12 22:35:18:
什么叫菌液攻毒?我现在在做的是抑菌实验,配制后确定浓度后即用了,不要长久保存。

那你是怎么确定浓度的?如果平板计数的话需要一天时间,那之后菌活力都不行了吧?
9楼2012-03-13 20:17:05
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skull123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
静静1434(金币+2): ★★★很有帮助 2012-03-14 09:26:01
可以考虑用吸光度来测量,先测出样品二倍稀释下的不同吸光度,同时每次稀释后的样本用平板计数,这样可以大致得出一个关系图,然后下次直接用无菌生理盐水慢慢稀释到那个吸光度范围就可以了,而且细菌溶度本身就是个不太精准的,1X10^9cfu/ml肯定不可能一定是这个数,都上亿了,或多或少都会有差异,但是一般不会影响太大,所以,,,,
10楼2012-03-13 23:42:04
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