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zzqbaidu

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白浓度测定的经验公式 标题要长啊 才能引起注意

在网上看到过一个蛋白浓度测定的经验公式,具体是这样的:


280nm和260nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收,在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在260nm处的吸收更强,其吸收高峰在260nm附近。核酸260nm处的消光系数是280nm处的2倍,而蛋白质则相反,280nm紫外吸收值大于260nm的吸收值。通常:
纯蛋白质的光吸收比值:A280/A260  = 1.8
纯核酸的光吸收比值: A280/A260 = 0.5
含有核酸的蛋白质溶液,可分别测定其A280和A260,由此吸收差值,用下面的经验公式,即可算出蛋白质的浓度。
蛋白质浓度(mg/ml)=1.45×A280-0.74×A260
此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所测定的数据来建立的。


我想问下有没有人用过这个公式测浓度,用的话发在文章里人家承不承认这种方法啊?我测的是植物蛋白

[ Last edited by zzqbaidu on 2012-3-1 at 14:34 ]
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zzqbaidu at 2012-03-02 09:07:34:
奥,谢谢  ,不过我每次用Bradford法时线性很难达到两个9,您是加了染液多久后测得?

j加燃料后等5min,在好像是30min内是稳定的,所以要快点测,不然你的样品容易沉淀。另外做三个重复,可以帮助你的R平方得到99%以上。
11楼2012-03-02 19:34:05
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:12
这是直接测量法,也有用的,但没有用BCA或者Bradford法测量的准确,所以只能做粗定量,不太准,有条件的话还是要用Bradford/BCA等方法,做实验麽,还是要可靠数据
3楼2012-03-01 19:15:10
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:23
自己实验定量吧   或用 nanodrop
4楼2012-03-01 20:31:12
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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zzqbaidu(金币+5): ★★★很有帮助 2012-03-02 08:56:31
紫外吸收法测蛋白含量,干扰因素多,误差很大,蛋白氨基酸组成不同,e值相差也很大,还是采取其他方法如福林酚法
5楼2012-03-02 08:21:19
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