| 查看: 1299 | 回复: 5 | ||
| 本帖产生 1 个 翻译EPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
lslsdjn金虫 (正式写手)
|
[求助]
一段关于蛋白质分子量测定的翻译。。。。。。。多谢多谢
|
|
|
For Mr determinations, the protein samples were mixed 1:1 with 2× SDS sample buffer containing β-mercaptoethanol and boiled for 5 min before being separated by SDS-PAGE. Prestained Mr（分子量） standards (BioRad) were run on each gel as a standard. Following electrophoresis, proteins were either visualized with Commassie Blue dye (BioRad) or transblotted to PVDF membrane (BioRad) using a transblot semidry electrophoretic transfer cell at 20V for 25–30 min. Transfers were done using 48 mM Tris, 39 mM Gly, 0.0375% (w/v) SDS, and 12% (v/v) methanol (pH 9.2) as a transfer buffer. Immunoblots were incubated with a 1:100 dilution (diluted in 1% BSA/TBST) of PPO antiserum developed from our purified wheat bran protein.Antigens were visualized by alkaline phosphatase-conjugated goat and antimouse (Sigma) and 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate and nitro blue tetrazolium (Sigma). |
回复此楼» 猜你喜欢
293求调剂
已经有14人回复
-
0703化学336分求调剂
已经有6人回复
-
304求调剂
已经有9人回复
-
281求调剂（0805）
已经有8人回复
-
环境领域全国重点实验室招收博士1-2名
已经有3人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有10人回复
-
301求调剂
已经有6人回复
-
一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有6人回复
-
26博士申请
已经有3人回复
eagle00768
木虫 (小有名气)
- 翻译EPI: 1
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 2301.1
- 红花: 4
- 帖子: 197
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 972676
- 注册: 2010-03-16
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
5楼2012-02-25 16:46:02
moqing1991
金虫 (正式写手)
- 翻译EPI: 6
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 2715.8
- 散金: 156
- 红花: 2
- 帖子: 517
- 在线: 151.8小时
- 虫号: 1070069
- 注册: 2010-08-05
- 专业: 有机分析
2楼2012-02-25 10:48:28
lslsdjn
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1190.2
- 散金: 259
- 红花: 6
- 帖子: 366
- 在线: 165.5小时
- 虫号: 1110399
- 注册: 2010-09-28
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
3楼2012-02-25 11:14:49
eagle00768
木虫 (小有名气)
- 翻译EPI: 1
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 2301.1
- 红花: 4
- 帖子: 197
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 972676
- 注册: 2010-03-16
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
lslsdjn(金币+10): ★★★★★最佳答案 真强！多谢！ 2012-02-25 17:11:09
| 为了确定蛋白的分子量大小，将蛋白样品与含β-巯基乙醇的2乘（也就是2倍）SDS缓冲液按1：1混合，煮沸5分钟，然后用SDS凝胶电泳来进行分离。预染好的分子量标准品（BioRad公司，即蛋白Marker）点在胶上作为对照。电泳后，可以用考马斯亮蓝（BioRad公司）来染蛋白进行检测或是用转膜仪在20伏电压下25-30分钟，将蛋白转印至PVDF（硝酸纤维素膜）上。转印时时所用缓冲液包含有48 mM Tris, 39 mM甘氨酸, 0.0375% (w/v) SDS, 以及 12% (v/v) 甲醇 (pH 9.2)。自我们提取的小麦糠蛋白纯化而得的PPO抗血清用1% BSA/TBST按照1：100进行稀释，进行免疫印迹孵育。抗原对应的抗体为碱性磷酸酶标记的羊抗鼠（Sigma公司）并用BCIP/NBT（Sigma公司）显色。 |
4楼2012-02-25 16:44:08
