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lslsdjn金虫 (正式写手)
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一段关于蛋白质分子量测定的翻译。。。。。。。多谢多谢
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For Mr determinations, the protein samples were mixed 1:1 with 2× SDS sample buffer containing β-mercaptoethanol and boiled for 5 min before being separated by SDS-PAGE. Prestained Mr（分子量） standards (BioRad) were run on each gel as a standard. Following electrophoresis, proteins were either visualized with Commassie Blue dye (BioRad) or transblotted to PVDF membrane (BioRad) using a transblot semidry electrophoretic transfer cell at 20V for 25–30 min. Transfers were done using 48 mM Tris, 39 mM Gly, 0.0375% (w/v) SDS, and 12% (v/v) methanol (pH 9.2) as a transfer buffer. Immunoblots were incubated with a 1:100 dilution (diluted in 1% BSA/TBST) of PPO antiserum developed from our purified wheat bran protein.Antigens were visualized by alkaline phosphatase-conjugated goat and antimouse (Sigma) and 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate and nitro blue tetrazolium (Sigma). |
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moqing1991
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2楼2012-02-25 10:48:28
lslsdjn
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3楼2012-02-25 11:14:49
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【答案】应助回帖
lslsdjn(金币+10): ★★★★★最佳答案 真强！多谢！ 2012-02-25 17:11:09
| 为了确定蛋白的分子量大小，将蛋白样品与含β-巯基乙醇的2乘（也就是2倍）SDS缓冲液按1：1混合，煮沸5分钟，然后用SDS凝胶电泳来进行分离。预染好的分子量标准品（BioRad公司，即蛋白Marker）点在胶上作为对照。电泳后，可以用考马斯亮蓝（BioRad公司）来染蛋白进行检测或是用转膜仪在20伏电压下25-30分钟，将蛋白转印至PVDF（硝酸纤维素膜）上。转印时时所用缓冲液包含有48 mM Tris, 39 mM甘氨酸, 0.0375% (w/v) SDS, 以及 12% (v/v) 甲醇 (pH 9.2)。自我们提取的小麦糠蛋白纯化而得的PPO抗血清用1% BSA/TBST按照1：100进行稀释，进行免疫印迹孵育。抗原对应的抗体为碱性磷酸酶标记的羊抗鼠（Sigma公司）并用BCIP/NBT（Sigma公司）显色。 |
4楼2012-02-25 16:44:08
eagle00768
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5楼2012-02-25 16:46:02
lslsdjn
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