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yinchaomin

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌 平菇 RNA如何提取,为什么凝胶检测有四条带

最近小弟在提平菇菌丝RNA,不知道什么原因,提出的RNA经凝胶检测有四条带,且带不是很亮,已经好几次是这样的状况了,急得很。请各位大侠帮帮忙,看看是怎么回事,用的是takara的tri-zol 经液氮研磨提取的,谢谢!
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xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yinchaomin at 2012-02-28 10:17:01:
想问下大侠,一般的tri-zol 应该没什么问题吧?实验中所有的东西都换过,除了tri-zol没换,是takara的,日期要到13年才过期,平时都是4度保存的,应该不会坏吧?老板让我重新买一瓶,我也不知道哪个公司的比较好 ...

这东西一般不会坏的,我们当年提棉花多酚和多糖杂质相当多,一般方法都不行,我们都是用自己配的CTAB提取液提的RNA,所以试剂选购方面我就帮不了你了。。。
14楼2012-02-28 10:28:33
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

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貌似有多糖什么的,你可以在沉淀那一步加点盐试试,具体搜索protocol
阳光总在风雨后
2楼2012-02-24 11:41:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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yinchaomin(金币+1): 有帮助 2012-02-25 21:06:53
hi ,你能不能将你的RNA纯化一下,然后走一个比较好的胶,看看是不是还是四条带?  还有,有没有其它的报道说你这个材料分离出来的total RNA是这样的四条带的?
致良知
3楼2012-02-24 23:37:22
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xiaoj9663

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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yinchaomin(金币+1): 有帮助 2012-02-25 21:05:14
看图的话拖带很严重,胶孔还有杂质残留,说明RNA提的不纯,蛋白质多糖残留过多。

另外我怀疑你的电泳上样量有点大,建议用这次1/5和1/10的RNA量再跑次电泳试试

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4楼2012-02-25 11:26:22
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