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吉林农大

木虫 (小有名气)

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[交流] 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签已有13人参与

为了对表达的蛋白进行后期纯化,就连入了相应的6组氨酸标签,这个标签与蛋白之间是如何接合的呢(Linker还是直接融合),接合后在蛋白过柱纯化时,又是如何得到没有6组氨酸标签的目的蛋白呢!这些问题,大家是怎么考虑的呢!
因为有的时候表达一种蛋白是要考虑到其空间构象的变化的,所以在表达成功后,一定要去除上面本来没有的东东,标签就是一个例子!

[ Last edited by 吉林农大 on 2012-2-23 at 01:11 ]

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我靠

1楼 2012-02-23 01:10:03

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凌波丽

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6组氨酸标签与目的蛋白的基因之间构建酶切位点，比如凝血酶的酶切位点，在用Ni-NTA树脂螯合目的蛋白质后不用咪唑洗，而直接用凝血酶（thrombin）加缓冲溶液切割6组氨酸标签与目的蛋白的酶切位点，这样洗脱下来的就是没有6组氨酸标签的目的蛋白质。凝血酶（thrombin）的酶切位点：基因工程表达系统中融合蛋白常用的连接序列，凝血酶处理可将融合蛋白中目的蛋白与非目的蛋白的肽段分离，最适切割位点是：P4-P3-P2-Arg↓-P1′-P2′，式中P4和P3为疏水氨基酸，P1′和P2′为非酸性氨基酸，↓为切割位点。