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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 竞争法ELISA检测小肽类抗原问题求助
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小二二小

新虫 (初入文坛)

[求助] 竞争法ELISA检测小肽类抗原问题求助

检测抗原为人血浆中加压素AVP（九肽），所用试剂盒为Enzo公司生产，原装进口。该试剂盒采用竞争法进行ELISA检测，检测前需对血浆样品预处理并冻干成粉末，然后再用试剂盒内提供的标准品稀释液溶解后检测。我对同一品样品先后进行了三次检测，检测用体积分别为1800ul血浆冻干250ul稀释液溶解、400ul血浆250ul稀释液溶解、1800ul血浆500ul稀释液溶解，但三次检测后换算为血浆浓度差很多，基本第一次是第二次浓度的20多倍，第二次是第三次浓度的2倍左右（换算为血浆浓度后）。请问大家有没有做竞争法ELISA检测的，遇到这种问题该怎么解决呢？多谢啦！
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1楼 2012-02-22 10:27:44
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小二二小

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 若水5886 at 2012-02-22 11:40:27:
我觉得血浆在冻干的过程中丧失了一些活性，所以你分别冻干再检测的话会有差异，你可以尝试从同一堆冻干粉中分别取出一点做检测，以减小误差

谢谢你的回答，不过这样不太可行，因为每份样品冻干后粉末本来就很少，取出一点做检测的话没办法推算出这部分粉末所来自的原始血浆体积，因此也就无法准确算出血浆中待检测物质的浓度。我曾将尝试过把同一份血浆样品分别取100ul、200ul来冻干，然后溶解检测，直接读出来的浓度也不是2倍的关系......
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3楼2012-02-22 15:28:26
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若水5886

新虫 (小有名气)

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小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-02-22 13:38:32
小二二小(金币+2): ★有帮助 2012-02-23 17:10:41
我觉得血浆在冻干的过程中丧失了一些活性，所以你分别冻干再检测的话会有差异，你可以尝试从同一堆冻干粉中分别取出一点做检测，以减小误差
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2楼2012-02-22 11:40:27
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小二二小(金币+2): ★有帮助 2012-02-23 17:10:52
是的，不会是绝对的2倍关系的。毕竟在冻干过程中不同体积的血浆含有不同的蛋白总量，你可以多做几个体积倍数，看看做出来的结果是怎么样的关系，不一定是倍数，但是可能是其它函数，这样也可以的哦
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4楼2012-02-23 10:02:04
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