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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 柱层析
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fair72

银虫 (小有名气)

[求助] 柱层析

各位师兄师姐，我从一天然药物中提取分离生物碱，首先进行粗分了，传统的正向硅胶柱层析，氯仿甲醇洗脱，现欲进一步细分，有Sephadex LH-20和反向C-18两种填料，请问选择哪一种更好分，并且速度快，流动相应该怎么选择呢？条件如何摸索？问的有点多，感谢了！
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没有失败，只有放弃
1楼 2012-02-22 09:26:40
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fjamigo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 谢谢参与交流 2012-02-22 09:59:41
fair72(金币+2): ★有帮助 2012-02-27 12:23:27
生物碱的差异性很大，我用过C18的反向柱，你可以试试，不过最好是能在硅胶板上跑薄层先检测一下看能否分开，确定你的洗脱体系，Sephadex LH-20这个柱子不是很熟悉但是我们实验室有用这个分过多糖的，如果第一个不行你在试试这个，
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2楼2012-02-22 09:32:10
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fair72

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by fjamigo at 2012-02-22 09:32:10:
生物碱的差异性很大，我用过C18的反向柱，你可以试试，不过最好是能在硅胶板上跑薄层先检测一下看能否分开，确定你的洗脱体系，Sephadex LH-20这个柱子不是很熟悉但是我们实验室有用这个分过多糖的，如果第一个不 ...

C-18反相柱的洗脱条件一般是甲醇-水呀，这个的条件怎么摸索呀，要点反向板的话也没有，就是这个让我为难哦
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没有失败，只有放弃
3楼2012-02-22 09:46:59
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cpulhy

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 鼓励新虫 2012-02-25 10:54:12
fair72(金币+4): ★有帮助 2012-02-27 12:23:41
之前你用氯仿甲醇初分过。极性应该不算很小。你要是实在不知道怎么选条件。可以试试从50%或者30%的甲醇水开始跑，逐渐加大比例。Sephadex LH-20是按分子大小分离的。如果你分离的成分，结构比较类似，分子量相差不多的话，分离效果不明显。我一般用它除色素效果比较好。
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4楼2012-02-22 13:20:11
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fair72

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by cpulhy at 2012-02-22 13:20:11:
之前你用氯仿甲醇初分过。极性应该不算很小。你要是实在不知道怎么选条件。可以试试从50%或者30%的甲醇水开始跑，逐渐加大比例。Sephadex LH-20是按分子大小分离的。如果你分离的成分，结构比较类似，分子量相差不 ...

实验室有HPLC，它可以用来摸索反向柱层析的条件吗？谢谢
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没有失败，只有放弃
5楼2012-02-23 08:42:38
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cpulhy

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以。操作方便一些，就是比较慢，也挺耗时间的。
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6楼2012-02-24 14:15:01
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