24小时热门版块排行榜    

查看: 2285  |  回复: 16

德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
估计你做的是野生菌的蛋白纯化,这不是一两步就更搞定的(当然也不排除有些蛋白比较好纯化),我先前也做过半年的蛋白纯化,就是反复的是不同的方法,你的蛋白的等电点这些参数只能稍微参考一下,即使是酸性蛋白也可以尝试各种离子柱,一般是先用DEAE这样的若阴离子柱,或者疏水柱试试,然后再换用强的阴离子柱(如Hitrap Q HP,或者Resource Q),中间也可以试试分子筛等!既然知道目的条带,估计也花不了多长时间,多做些样品,这样就能保证一次尝试很多种柱子,甚至可以纯化出来一定的量。
我用我有限的青春等你的回心转意!
11楼2012-02-22 22:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hugh_811

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你的杂蛋白和目的蛋白分子量差的很大,可以先用超滤的方法去除一些。再试着离子——疏水——凝胶过滤的步骤做个三步纯化试试。
12楼2012-02-23 06:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有标签么?最好先富集下
13楼2012-03-02 13:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhjzxg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以试一下聚丙烯酰胺凝胶电泳或者用蛋白酶水解
适合自己的就是最好的!
14楼2012-03-02 13:30:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
硫酸铵分级沉淀试下,虽然简单,但是实用有效。
15楼2012-03-02 16:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清木ing

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-20 10:25:44:
既然你的蛋白那么多,肯定是过一根柱子是不行的,也不知道你蛋白的等电点,我觉得你可以先过分子筛,在过离子交换,或者反过来试试也行,过离子交换不止一根柱子。

目标蛋白的等电点是5.3啊
16楼2012-03-07 10:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清木ing

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by dshlove at 2012-03-02 13:23:21:
有标签么?最好先富集下

没有标签的
17楼2012-03-07 10:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 清木ing 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] fileCode有新解读? +8 Tide man 2026-08-08 16/800 2026-08-08 09:59 by Tide man
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见