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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

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估计你做的是野生菌的蛋白纯化,这不是一两步就更搞定的(当然也不排除有些蛋白比较好纯化),我先前也做过半年的蛋白纯化,就是反复的是不同的方法,你的蛋白的等电点这些参数只能稍微参考一下,即使是酸性蛋白也可以尝试各种离子柱,一般是先用DEAE这样的若阴离子柱,或者疏水柱试试,然后再换用强的阴离子柱(如Hitrap Q HP,或者Resource Q),中间也可以试试分子筛等!既然知道目的条带,估计也花不了多长时间,多做些样品,这样就能保证一次尝试很多种柱子,甚至可以纯化出来一定的量。
我用我有限的青春等你的回心转意!
11楼2012-02-22 22:31:22
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hugh_811

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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如果你的杂蛋白和目的蛋白分子量差的很大,可以先用超滤的方法去除一些。再试着离子——疏水——凝胶过滤的步骤做个三步纯化试试。
12楼2012-02-23 06:27:16
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dshlove

木虫 (正式写手)

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有标签么?最好先富集下
13楼2012-03-02 13:23:21
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lhjzxg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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可以试一下聚丙烯酰胺凝胶电泳或者用蛋白酶水解
适合自己的就是最好的!
14楼2012-03-02 13:30:56
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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硫酸铵分级沉淀试下,虽然简单,但是实用有效。
15楼2012-03-02 16:20:38
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清木ing

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-20 10:25:44:
既然你的蛋白那么多,肯定是过一根柱子是不行的,也不知道你蛋白的等电点,我觉得你可以先过分子筛,在过离子交换,或者反过来试试也行,过离子交换不止一根柱子。

目标蛋白的等电点是5.3啊
16楼2012-03-07 10:43:22
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清木ing

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by dshlove at 2012-03-02 13:23:21:
有标签么?最好先富集下

没有标签的
17楼2012-03-07 10:45:21
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