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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白纯化问题
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德克士27

金虫 (小有名气)

实验狂人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计你做的是野生菌的蛋白纯化，这不是一两步就更搞定的（当然也不排除有些蛋白比较好纯化），我先前也做过半年的蛋白纯化，就是反复的是不同的方法，你的蛋白的等电点这些参数只能稍微参考一下，即使是酸性蛋白也可以尝试各种离子柱，一般是先用DEAE这样的若阴离子柱，或者疏水柱试试，然后再换用强的阴离子柱（如Hitrap Q HP，或者Resource Q），中间也可以试试分子筛等！既然知道目的条带，估计也花不了多长时间，多做些样品，这样就能保证一次尝试很多种柱子，甚至可以纯化出来一定的量。
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我用我有限的青春等你的回心转意！
11楼2012-02-22 22:31:22
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hugh_811

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你的杂蛋白和目的蛋白分子量差的很大，可以先用超滤的方法去除一些。再试着离子——疏水——凝胶过滤的步骤做个三步纯化试试。
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12楼2012-02-23 06:27:16
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有标签么？最好先富集下
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13楼2012-03-02 13:23:21
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lhjzxg

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试一下聚丙烯酰胺凝胶电泳或者用蛋白酶水解
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适合自己的就是最好的！
14楼2012-03-02 13:30:56
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
硫酸铵分级沉淀试下，虽然简单，但是实用有效。
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15楼2012-03-02 16:20:38
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清木ing

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-02-20 10:25:44:
既然你的蛋白那么多，肯定是过一根柱子是不行的，也不知道你蛋白的等电点，我觉得你可以先过分子筛，在过离子交换，或者反过来试试也行，过离子交换不止一根柱子。

目标蛋白的等电点是5.3啊
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16楼2012-03-07 10:43:22
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清木ing

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by dshlove at 2012-03-02 13:23:21:
有标签么？最好先富集下

没有标签的
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17楼2012-03-07 10:45:21
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