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沁雪飘逸新虫 (小有名气)
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[求助]
怎么测定氨基氮的转化率?
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怎么测定氨基氮的转化率?求方法? 月桂酰氯与多肽聚合物反应后怎么测定其转化率?我想测定氨基氮的转化率,可是暂时没想到方法,求解? |
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沁雪飘逸
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4楼2012-02-22 11:18:31
arokas
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【答案】应助回帖
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氨氮测定 （发酵液中氨氮含量通过酚-次氯酸法） （1）容器的清洗：所有配制试剂的容器都用重铬酸钾洗液浸洗后清水冲洗干净，并用去离子水润洗三次烘干。 （2）试剂的配制：所有试剂都用超纯水配制。 试剂A：苯酚10 g/L，亚硝基铁氰化钠•2H2O 100 mg/L，37℃时实测pH为7.5-7.8。4℃避光可存30天以上。 试剂B-Ⅰ：缓冲溶液体系分别含有0.4 M Na2HPO4和0.2 M NaOH，37℃时实测pH为11.5-11.6。室温存放不超过60天。 试剂B-Ⅱ：以NaClO成品溶液（标示活性氯≥5.2%）配制NaOH溶液。NaOH含量为 2 mol/L。 试剂B：试剂B-Ⅱ：试剂B-Ⅰ=1:100 (v/v), 37℃时实测pH约为11.50-11.70，混合摇匀备用，配置后于4℃可保存14天。 铵标准液贮存液：称取3.819 g经100oC干燥过的优级纯氯化铵溶解于水中，移入1000 mL容量瓶中，稀释至标线（溶液浓度为 1.00 mg氨基氮/mL)。 （3）绘制标准曲线 将铵标准贮存液进行一系列稀释，分别为100倍、50倍、40倍、20倍、10倍。依次加入20 μL标准溶液（系列浓度梯度稀释后），2.5 mL的试剂A和2.5 mL的试剂B，10s内立即摇匀，于37oC水浴中保温30 min，取出于630nm处比色测定，蒸馏水调零（20 min内完成全部测定）。绘制标准曲线。如图2.1，在氨氮检测剂量0-2 μg内，氨氮含量和A630nm间有很好的线性相关性。 标样浓度（N mg/mL） 0 0.01 0.02 0.025 0.05 0.1 1 取液量（定容10mL） 0 0.1 0.2 0.25 0.5 1 10 标品测定量（µg） 0 1 4 6.25 25 100 10000 A630nm 以标品测定量（µg）为横坐标，对应的吸光值A630nm为纵坐标，绘制标准曲线，并回归如下方程式： Y=AX+B，其中R2应大于0.99。 （4）样品测定 将待测样品于10,000×g 4°C离心5 min，取无油脂上清液进行测定。 根据待测样品中大概氨氮含量，对样品系列稀释（稀释倍数n为1,10,100,1000）。于试管中依次加入20 μL样品稀释液，2.5 mL的试剂A和2.5 mL的试剂B，10s内立即摇匀，于37oC水浴中保温30-50 min，取出于630 nm处比色测定，蒸馏水调零。空白样品混合液吸光值应为0.010-0.040（这决定于所用试剂的质量以及蒸馏水的纯度）。计算公式如下所示： 其中，AN为样品中的氨氮浓度(g/L)；n为样品稀释倍数，A630 nm为样品在630 nm下的吸光值，A和 B为标准曲线回归公式中的系数。当A630 nm测定数值在0.08-0.8范围所对应的稀释倍数为有效稀释倍数，如不在此范围内可调节样品的稀释倍数，使测量值在此范围内）。 |
3楼2012-02-19 20:12:54
