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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 分析前沿 » 多重荧光标记实验中，如何选择荧光染料
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87328068

新虫 (小有名气)

[求助] 多重荧光标记实验中，如何选择荧光染料

我想用5种不同的荧光素分别标记5种单抗，用来在同一体系内同时检测5种抗原，请问该选择哪5种荧光素？衷心感谢！
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1楼 2012-02-07 23:00:15
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87328068

新虫 (小有名气)
有哪位了解吗？谢谢！先自己顶一下。
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2楼2012-02-08 11:48:17
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
87328068(金币+10): ★★★很有帮助 谢谢了！ 2012-02-08 12:00:30
这问题有点偏离板块内容
难度挺大的，你是用激光共聚焦观察吗？仪器好像只有三色吧
不过如果你的仪器支持这种实验方法的话，你可以依据以下原则选择染料
染料间的最多激发波长相差应该不小于50nm，发射波长自然就是差别越大约好了。
同时测定又困哪！
建议看一下 分子探针手册 The Molecular Probes  Handbook     A Guide to Fluorescent Probes and La beling Technologies
会有帮助的！
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3楼2012-02-08 11:58:49
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87328068

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chaijudi at 2012-02-08 11:58:49:
这问题有点偏离板块内容
难度挺大的，你是用激光共聚焦观察吗？仪器好像只有三色吧
不过如果你的仪器支持这种实验方法的话，你可以依据以下原则选择染料
染料间的最多激发波长相差应该不小于50nm，发射波长自然 ...

请问用普通荧光显微镜换不同的滤光片不行吗？对此我完全是外行，敬请不吝赐教！
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4楼2012-02-08 12:55:52
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

87328068(金币+10): ★★★很有帮助 2012-02-08 19:56:35
应该可以，就看滤光片了！
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5楼2012-02-08 14:09:25
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87328068

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by chaijudi at 2012-02-08 14:09:25:
应该可以，就看滤光片了！

担心反复换不同的滤光片会导致光漂白，所以不知该如何选择荧光染料。哎...
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6楼2012-02-08 19:58:11
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87328068

新虫 (小有名气)
例如通常的双标记法使用FITC和RB-200标记的两种不同抗体，用不同滤光片进行观察，可以在同一体系内同时检测2种抗原。如olympus荧光显微镜，观察FITC标记抗体，激发滤光片用RG-12，压制滤光片用O-350；观察RB-200标记抗体，激发滤光片用UG-1，压制滤光片用R-610。
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7楼2012-02-08 20:39:31
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87328068

新虫 (小有名气)
恳请哪位牛人解答！
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8楼2012-02-08 21:19:07
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87328068

新虫 (小有名气)
自己顶一下。
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9楼2012-02-09 14:23:08
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Geminizhen

铁杆木虫 (正式写手)
有人知道哪些荧光染料在三百多激发，4百多发射，可以与FITC和罗丹明区分开吗？
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10楼2012-08-29 16:38:17
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