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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的质粒怎么回事，一直不好，请各位达人帮忙看一下
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chenhuize

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果用试剂盒提的话，那最好有mini nano 测一下纯度。如果纯度好的话就不用看胶图了。只要够后续试验就好了。
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11楼2012-02-08 07:17:36
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weilson

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从电泳图上来看，你的质粒是可以的。如果你上样量1μl，这样的浓度 做载体连接，已经够了。上样量体积加大，回收吧
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12楼2012-02-08 10:07:19
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒电泳跑出来两条带正常，从图上看你提取的质粒浓度已经可以了，至少和marker浓度差不多，不管接下来要作转化还是别的，这样的浓度应该足可以了
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13楼2012-02-08 14:46:12
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love三人游

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-08 14:46:12:
质粒电泳跑出来两条带正常，从图上看你提取的质粒浓度已经可以了，至少和marker浓度差不多，不管接下来要作转化还是别的，这样的浓度应该足可以了

恩。可是我拿去测序结果总是说不能喝引物识别，我之前都是和测序引物做过PCR的啊
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14楼2012-02-08 20:05:40
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lynni

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉挺好的，不过是不是都是一种，为什么跑的差好多？第六个也太多了~~
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淘喜欢的一切
15楼2012-02-09 00:21:50
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love三人游

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by lynni at 2012-02-09 00:21:50:
感觉挺好的，不过是不是都是一种，为什么跑的差好多？第六个也太多了~~

都是同一个载体连得同一个目的基因。。对，我发现差好多啊
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16楼2012-02-09 10:55:29
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fengbo0509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
出现几条带主要是由于提取出的质粒结构不同。一般2-3条带都是正常的。
主要有完整的闭环，半开环和开环3种形态。操作上细微动作可能会造成不同的结果。
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17楼2012-02-09 14:48:57
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chunying@

新虫 (初入文坛)
您好!我是测序公司的。跑完电泳的质粒有几条带是正常的现象，因为质粒有几种不同的形态，所以在同浓度的胶下它的迁移率是不同的。你说质粒的浓度低，那可能与您的菌液浓度、抽提的试剂等有关。其实你也可以考虑下叫测序公司给你提取质粒的，有些公司是不收取费用的。你只要提供菌液就行的。另外，如果你直接提供质粒的话，测序公司会根据你质粒的浓度决定测序时加入多少模板，所以你不必担心。
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成功来自于不断的努力与激情
18楼2012-02-09 15:05:45
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-08 14:46:12:
质粒电泳跑出来两条带正常，从图上看你提取的质粒浓度已经可以了，至少和marker浓度差不多，不管接下来要作转化还是别的，这样的浓度应该足可以了

既然你做PCR可以P的出来那就说明你的引物和质粒模板是对应的，建议你联系测序公司，让他们好好核实一下
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19楼2012-02-12 08:40:37
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒提的不错了，建议先做一下没切验证，如果没问题了就去测序。
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20楼2012-02-12 09:14:32
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