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ice2009girl

金虫 (小有名气)

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[交流] 问一下做海藻里面小极性成分的同学，色素怎么去除？

小的现在做的是海藻里的小极性成分，比如甾醇什么的，有一个问题就是色素太多，特别是叶绿素类的，跑板几乎就是绿色的跑道一样难看，硅胶层析分布出来，LH-20凝胶分离效果也不咋好。
我想问问各位做植物化学，特别是海洋植物化学的朋友，这类色素怎么除去？越早除去越好，不然对目标成分的含量估计都造成影响。墨绿色一团糊糊的，难过死了

大家新年好啊多吃饺子啊！！

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1楼 2012-01-22 11:10:57

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wesker890211

木虫 (正式写手)

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★ ★
xiaoxiao270(金币+2): 3Q 2012-01-27 20:26:45

引用回帖:

35楼: Originally posted by ice2009girl at 2012-01-25 16:38:49:
没看出来极性的差异，如何用正相柱分离？实验室条件所限，没有小孔树脂T_T

没有小孔树脂就算了吧，这个就不做了，这个只是一个净化的过程。

我们先把实验从头过一遍：
首先，你用试剂对海藻的样品进行了提取，得到了提取液A（里面有你所需要的物质甲，还有你最头疼的叶绿素）
接着，你做了一件事情，就是VLC梯度洗脱，将提取液A分成了若干个部位，这时候，物质甲和叶绿素在什么地方呢？基质上的死吸附肯定是存在着损耗的，对所有的物质，所以，物质甲和叶绿素都会有一部分损耗在基质上面。使用了各种溶剂从极性小的，向极性大的依次去洗脱。
由于叶绿素的极性很小，所以石油醚部位的叶绿素含量应该是最高的（墨绿色，蒸干后看起来黑乎乎的），这样石油醚后面的部位，叶绿素虽然一定还会存在，但是量相比之下已经是很少了。
通过你自己的确定，物质甲是通过二氯甲烷洗脱的，说明物质甲在二氯甲烷部位中含量最高，而因为二氯甲烷的极性也不是很大，所以洗脱液也是绿色的（含有叶绿素），这时候，你用洗脱液跑了一块薄层板，头疼的叶绿素从上跑到下。
然后，你崩溃了……

实验室的条件有限，很多东西都没办法使用，这个是很正常的，这个时候需要做的是转变思路，而不是硬找实验室没有的东西，最后因为没找到而郁闷很久。

换个角度来看一下，二氯甲烷部位相比于提取液A来说叶绿素的含量是不是已经低了很多，那么在没有有效的直接去除它的方法的情况下，能不能把它当作是一个一般杂质来对待，仅仅是这个杂质不过比较绿。

只是做完了分部位而已，这只是分离过程的开始，指望在分离过程的第一步就把所需物质直接拿到手，除了极少数极端特殊的成分外，应该没有捷径的吧。按照分离的一般步骤来说，分完部位以后的第二步是上一根柱子达到部位内部的初始分离。

这样要做的也仅仅只是一个初始分离，于是我想到了两个方案：
方案一：使用最基本的硅胶作为基质，以二氯甲烷为中心选择两个溶剂进行梯度洗脱，得到10－30个部分，分别通过薄层定位来判断物质A的位置。

方案二：因为二氯甲烷部位的极性相比较而言还算是比较小的，这时候找正相的基质，以二氯甲烷作为洗脱剂，通过色带和体积来判断流出组分中物质A的位置，这样比较普通的反向分离方法可能分离效果更加好一点。

做完这一步，再按照你的需求再看看是否需要继续分离下去。