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[求助]
overlap PCR做不出来呐。。。。
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| 连接两个片段，分别PCR均P出来，连接做不出来，试过好几次了。片段分别为1500和3000，变性时间2min，延伸5min。求助各位前辈。。。不甚感激！！！ |
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22楼2014-09-22 14:54:45
imyting
至尊木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 很专业哦，值得学习 2012-01-09 13:36:08
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小丹木木(金币+2): 很专业哦，值得学习 2012-01-09 13:36:08
| OVERLAPPING PCR一般来说应该分为三步，第一步正是楼主说的分别P两个片段，第二步应该是不加两端引物以两个片段的PCR产物为模板进行3-5个循环（此步骤退火温度可以低点），第三步是在第二步反应终止时加入两端引物条件自定。关键还是退火温度的控制，有时候你P不出来不一定就是你的条件不好。我也试过不经过第二步直接P，也有成功的时候。如果实验室经费比较充裕还是买试剂盒吧，大约50元一次。你也可以把你的PCR条件附上，大家都看看怎么样。 |
2楼2012-01-09 12:44:15
fwks3518
木虫 (正式写手)
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3楼2012-01-09 14:12:26
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-01-09 17:50:25
651424759(金币+10): ★★★★★最佳答案 各方面的情况都分析到啦，O(∩_∩)O谢谢 2012-01-12 09:44:00
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 根据楼主反馈，授予EPI！ 2012-01-17 21:18:54
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4楼2012-01-09 15:11:00
