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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母菌落PCR的方法
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snowrain0913

新虫 (初入文坛)

[交流] 酵母菌落PCR的方法

大家做酵母菌落PCR都是用什么方法呢？我是先将细胞在sds里97度煮十分钟，然后用水洗两次后加入PCR体系中。但是效果很差，有没有好的建议呢？
我的PCR程序是 95℃6min
95℃20s  XX℃30s  72℃XXmin    30循环
72℃5Min
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1楼2012-01-05 16:32:27
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snowrain0913

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-01-05 17:25:38:
酵母细胞壁很厚，比较难破胞。我见有的实验室是加个裂解缓冲液，然后微波炉加热来破胞的。详情得打听下了。

开始加SDS煮十分钟就是为了破壁的，但还是什么都P不出来啊，感觉不应该是转化的问题
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5楼2012-01-05 18:04:51
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snowrain0913

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 凡子1985 at 2012-01-05 20:50:31:
不需要那么麻烦，直接挑菌涂在管里，然后放微波炉里最大温度转1分钟，然后加入反应体系就可以了，我们实验室都这么做，不要想的太困难。

那效果如何呢？我在SDS里97度煮十分钟和您在微波炉里转1分钟应该差不多吧？
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10楼2012-01-06 10:04:34
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snowrain0913

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 小丹木木 at 2012-01-06 10:07:48:
在预热的时候延长时间，在设计PCR体系是时候，这样试试
95℃  10~15min
95℃20s  XX℃30s  72℃XXmin    30循环
72℃5Min
我做的时候，就这样子的，都能P出来的。
[ Last edited by 小丹木木 on 2012-1-6 ...

之前已经先97度煮10Min 后来又95度煮6分钟 这样还不够吗？
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14楼2012-01-06 18:21:29
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