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shirlin16888

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 有关猪心中提取细胞色素c的问题~

各位大侠进来帮帮忙啊！知道其中一个也可以留言啊！呼叫大侠！
1、在本实验中，先要调到PH4.0，再调到PH6.0，再调到PH7.2，我明白PH7.2是什么原因。但是PH4.0和PH6.0不太明白，知道是要通过酸溶解细胞色素c出来，但是为什么要先调到4.0再调到6.0？这两步有什么区别？目的不一样吧？
2、调到PH6.0之后，有一步操作是离心；在PH调到7.2之后，等电点等于7.2的蛋白沉淀了，静置30min后过滤。请问这个离心和过滤能否互换？为什么？
3、硫酸铵洗脱吸附在沸石上的细胞色素c的原理。硫酸铵洗脱之前为什么用蒸馏水先洗脱，再用0.2%氯化钠洗脱，然后再用硫酸铵洗脱？
4、在透析后，样品中加入增容液，为什么再用沸水浴煮？加入溴酚蓝后，为什么又离心？离心下什么？为什么在离心前加入溴酚蓝啊？离心完要电泳的，先离心再加溴酚蓝上样电泳不行吗？
5、在本实验中，每一小步都什么原理？除的什么蛋白？
步骤：调PH4.0，搅拌器1.5h，调PH6.0，离心6000*20min，调PH7.2，静置30min，过滤，吸附柱吸附（沸石），蒸馏水、0.2%氯化钠、25%硫酸铵洗脱，加入硫酸铵固体至饱和度45%盐析，静置30min，过滤，三氯乙酸沉淀，离心3000*15（此处的离心可否和上上步的过滤互换？），加入25ml蒸馏水搅拌，透析，加入增容液，沸水浴8Min，加入溴酚蓝，离心10000*8
6、一开始要用生理盐水清洗猪心组织而不是蒸馏水，为什么？

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1楼2011-12-30 23:12:44

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