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shirlin16888

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关猪心中提取细胞色素c的问题~

各位大侠进来帮帮忙啊!知道其中一个也可以留言啊!呼叫大侠!
1、在本实验中,先要调到PH4.0,再调到PH6.0,再调到PH7.2,我明白PH7.2是什么原因。但是PH4.0和PH6.0不太明白,知道是要通过酸溶解细胞色素c出来,但是为什么要先调到4.0再调到6.0?这两步有什么区别?目的不一样吧?
2、调到PH6.0之后,有一步操作是离心;在PH调到7.2之后,等电点等于7.2的蛋白沉淀了,静置30min后过滤。请问这个离心和过滤能否互换?为什么?
3、硫酸铵洗脱吸附在沸石上的细胞色素c的原理。硫酸铵洗脱之前为什么用蒸馏水先洗脱,再用0.2%氯化钠洗脱,然后再用硫酸铵洗脱?
4、在透析后,样品中加入增容液,为什么再用沸水浴煮?加入溴酚蓝后,为什么又离心?离心下什么?为什么在离心前加入溴酚蓝啊?离心完要电泳的,先离心再加溴酚蓝上样电泳不行吗?
5、在本实验中,每一小步都什么原理?除的什么蛋白?
步骤:调PH4.0,搅拌器1.5h,调PH6.0,离心6000*20min,调PH7.2,静置30min,过滤,吸附柱吸附(沸石),蒸馏水、0.2%氯化钠、25%硫酸铵洗脱,加入硫酸铵固体至饱和度45%盐析,静置30min,过滤,三氯乙酸沉淀,离心3000*15(此处的离心可否和上上步的过滤互换?),加入25ml蒸馏水搅拌,透析,加入增容液,沸水浴8Min,加入溴酚蓝,离心10000*8
6、一开始要用生理盐水清洗猪心组织而不是蒸馏水,为什么?
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