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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot中蛋白质转印问题
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-31 22:07:15
本帖仅楼主可见
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11楼2011-12-31 08:37:11
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caozi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-31 22:07:34
西瓜: 回帖置顶 2011-12-31 22:07:35
marker上面不同分子量大小的条带转膜的速度是不一样的，小分子量的条带会先转过去，大分子量的条带转膜时间较长，你看看你的目的蛋白的分子量是多少，在你的目的蛋白分子量附近的两条marker带是留在了凝胶上还是已经转到第二张膜上了，再做分析
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12楼2011-12-31 11:10:44
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fooooooooox

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
lywac(金币+1): 这些都是基本的 2012-02-13 08:52:05
电流方向别反了，page gel 确定跑的好，buffer 在每次用之前加甲醇
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13楼2012-02-12 00:17:16
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pzy563003

银虫 (初入文坛)
膜和滤纸接触的紧不紧也有很大的关系，建议转之前先用玻璃棒赶已下
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同情苦难、追求知识。
14楼2012-03-12 08:43:39
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)
25kD左右的蛋白用70V，230mA转膜1个小时，效果还可以，但大分子量的Marker会有部分留在胶里。可以换用预染的Marker跑胶。
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15楼2012-05-19 22:56:34
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lengol

新虫 (初入文坛)
我的蛋白的分子量是78kd，如果胶是1.5mm的就用180mA，恒流3h，如果是1.0mm的就用180mA恒流2.5h
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16楼2012-06-05 13:11:27
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dwc326

铁虫 (初入文坛)
其实能不能转过去有很多影响因素！
楼上各种条件都可以转，也就是说有个大致范围。
我们实验室常用条件：湿转
慢点的，转上去再吃个饭，休息会：恒压30V或者恒流200mA 2h, 70KD以下全部可以。70KD以上在此基础上外加350mA 30min，目前做的最大的是280KD指标，没有问题
快点的：直接350mA 30-40min,70KD以下没有问题。70KD以上同上。
注意到一个各位虫友没注意的问题：转膜液的酸碱也会影响效率，酸一点转的更好些，我们一般是常规转膜液800mL使用前加1.5~2mL 盐酸，再加甲醇，2mL的效率就比1.5的好。
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17楼2013-11-01 14:35:25
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dwc326

铁虫 (初入文坛)
另外，我们使用的是Fermentas（现在被Thermo收购了）的预染marker，很漂亮也很容易分辨
跑的时候就能知道多大的蛋白跑到什么位置
转完了膜上各种颜色的marker很漂亮
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18楼2013-11-01 14:38:16
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