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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western blot中蛋白质转印问题
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lywac

铜虫 (小有名气)

[求助] western blot中蛋白质转印问题

请教各位虫友，在western blotting中蛋白转印后，mark不清楚，是什么原因？另外，请教各位，你们做的时候，电流、电压分别多大？给个参考，先行谢过啦
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等你，是我一生的承诺
1楼 2011-12-28 17:02:20
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caozi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-31 22:07:34
西瓜: 回帖置顶 2011-12-31 22:07:35
marker上面不同分子量大小的条带转膜的速度是不一样的，小分子量的条带会先转过去，大分子量的条带转膜时间较长，你看看你的目的蛋白的分子量是多少，在你的目的蛋白分子量附近的两条marker带是留在了凝胶上还是已经转到第二张膜上了，再做分析
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12楼2011-12-31 11:10:44
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neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): good 2011-12-29 17:44:08
marker不清楚，你确定在转膜缓冲液加甲醇了吗？膜之前也要拿甲醇活化5-10秒钟
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2楼2011-12-29 14:15:28
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-12-30 09:24:14
在转膜过程中，110mA恒流，90min，是不是转膜时间不够啊？一般来说小分子蛋白20kd一下转膜45min就可以，分子量大一些的90min就可以了。另外，转膜时，胶和膜贴在一起后尽量别在移动，不然条带不清楚，影响结果。
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聪明才智要为意外做准备~~
3楼2011-12-29 15:13:18
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ljw796

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+1): 鼓励交流！ 2011-12-30 09:24:21
能否说下你的实验步骤，以便于大家分析？
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4楼2011-12-29 16:13:39
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