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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 什么是限制性内切核酸酶的星号活性?
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shiliu2011

木虫 (正式写手)

[交流] 什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 已有5人参与

什么是限制性内切核酸酶的星号活性?双酶切选择buffer时，是应该选没有星号活性的效率较低的buffer OR 效率为100带有星号活性的buffer？为什么？
     本人是新手，还望各位高级别的虫子赐教！谢谢！
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1楼 2011-12-28 10:34:45
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by sususimple at 2011-12-29 08:44:25:
建议选用没有星号活性，而且两个酶都能保持较高酶切效率的buffer。若实在是某个酶效率太低，可以分两次酶切。

分两次酶切，buffer体系不一样了，必须得纯化以后在进行第二次酶切吧？
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8楼2011-12-29 09:17:47
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c3024034

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流！good 2011-12-28 12:54:37
：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星   活性。  
   概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：
(1)高甘油含量(>5％, v／v)；
(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；
(3)低离子强度(<25 mmol／L)；
(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；
(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等

选用效率为100带有星号活性的buffer，
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2楼2011-12-28 11:20:44
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shiliu2011

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by c3024034 at 2011-12-28 11:20:44:
：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称 ...

还是不太懂。。。。星号活性就是酶切位点发生改变了呀，那选择100带有星号活性的buffer，不是就会导致错切嘛？
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3楼2011-12-28 14:30:03
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by shiliu2011 at 2011-12-28 14:30:03:
还是不太懂。。。。星号活性就是酶切位点发生改变了呀，那选择100带有星号活性的buffer，不是就会导致错切嘛？

2楼已经说了发生星号活性的几个因素，你按照说明书介绍的正常酶切条件，是不会有星号活性的啦。
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4楼2011-12-28 14:58:53
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