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关于聚酰胺柱层析预处理的问题!急
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最近装了几次聚酰胺柱,发现流速很慢,洗脱不下来,据文献上讲是粉过细的原因.对聚酰胺的处理只是按说明上用乙醇冲洗至澄清,但有人说这样不行.想请问下各位高手,聚酰胺装柱前的预处理及洗脱中要注意哪些问题,经验资料均可,多谢啦!!! |
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 植化实验 |
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新买回来的聚酰胺处理大全（第一发帖鼓励一下，请求加金币）
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工业乙醇浸泡过夜后装柱，用3～4倍体积的工业乙醇洗涤，最后洗涤液水浴蒸干，待只有少量杂质后，2倍氢氧化钠的低浓度溶液洗涤，最后1倍量水洗，然后2～3倍10％的醋酸洗涤，最后用蒸馏水洗。 聚酰胺(Polyamide)是由酰胺聚合而成的一种高分子化合物，商品名：锦纶、尼龙。 锦纶中通常有两种杂质：一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质（锦纶丝再制成以后，表面涂有一层蜡）。这些杂质必须除去，否则原料单体及其小分子聚合物可与酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来，与分离之物质混在一起则难以除去。 除去原料单体及其小分子聚合物的方法文献报道：用二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基甲酰胺：醋酸：水：乙醇（5：10：30：20）混合液洗脱。除去蜡质的方法文献报道：用甲醇：二氯乙烷（1：1）混合液洗脱。 建议较好的可行方法：取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2-2.5倍体积的5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱，最后用蒸馏水洗脱至pH中性，备用。 用过的聚酰胺，一般用5%NaOH水溶液洗脱，洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附，用NaOH水溶液很难洗脱，可用5%NaOH在柱中浸泡，每天将柱中的NaOH水溶液放出一次，并加入新的5%NaOH水溶液，这样浸泡一周后，鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9，再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱，最后蒸馏水洗脱至pH中性，重复使用。  |
5楼2007-02-09 11:25:28
新买回来的聚酰胺有说明书的按说明书处理，没有说明书的看下面内容：
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karl2100(金币+2):不错，回答楼主提出的问题后我们会适当加金币，用不着“请求加金币”。每天会有专门评分的版主进行评贴。最后，谢谢！
karl2100(金币+2):不错，回答楼主提出的问题后我们会适当加金币，用不着“请求加金币”。每天会有专门评分的版主进行评贴。最后，谢谢！
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工业乙醇浸泡过夜后装柱，用3～4倍体积的工业乙醇洗涤，最后洗涤液水浴蒸干，待只有少量杂质后，2倍氢氧化钠的低浓度溶液洗涤，最后1倍量水洗，然后2～3倍10％的醋酸洗涤，最后用蒸馏水洗。 新买回来的聚酰胺有说明书的按说明书处理，没有说明书的看下面内容： 聚酰胺(Polyamide)是由酰胺聚合而成的一种高分子化合物，商品名：锦纶、尼龙。 锦纶中通常有两种杂质：一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质（锦纶丝再制成以后，表面涂有一层蜡）。这些杂质必须除去，否则原料单体及其小分子聚合物可与酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来，与分离之物质混在一起则难以除去。 除去原料单体及其小分子聚合物的方法文献报道：用二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基甲酰胺：醋酸：水：乙醇（5：10：30：20）混合液洗脱。除去蜡质的方法文献报道：用甲醇：二氯乙烷（1：1）混合液洗脱。 建议较好的可行方法：取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）。再依次用2-2.5倍体积的5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱，最后用蒸馏水洗脱至pH中性，备用。 用过的聚酰胺，一般用5%NaOH水溶液洗脱，洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附，用NaOH水溶液很难洗脱，可用5%NaOH在柱中浸泡，每天将柱中的NaOH水溶液放出一次，并加入新的5%NaOH水溶液，这样浸泡一周后，鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9，再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱，最后蒸馏水洗脱至pH中性，重复使用。 |
6楼2007-02-09 11:27:36
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