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hotfish918

银虫 (初入文坛)

[交流] 关于聚酰胺柱层析预处理的问题!急

最近装了几次聚酰胺柱,发现流速很慢,洗脱不下来,据文献上讲是粉过细的原因.对聚酰胺的处理只是按说明上用乙醇冲洗至澄清,但有人说这样不行.想请问下各位高手,聚酰胺装柱前的预处理及洗脱中要注意哪些问题,经验资料均可,多谢啦!!!
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jxglyh

银虫 (初入文坛)

新买回来的聚酰胺处理大全(第一发帖鼓励一下,请求加金币)

工业乙醇浸泡过夜后装柱,用3~4倍体积的工业乙醇洗涤,最后洗涤液水浴蒸干,待只有少量杂质后,2倍氢氧化钠的低浓度溶液洗涤,最后1倍量水洗,然后2~3倍10%的醋酸洗涤,最后用蒸馏水洗。
聚酰胺(Polyamide)是由酰胺聚合而成的一种高分子化合物,商品名:锦纶、尼龙。
锦纶中通常有两种杂质:一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质(锦纶丝再制成以后,表面涂有一层蜡)。这些杂质必须除去,否则原料单体及其小分子聚合物可与酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来,与分离之物质混在一起则难以除去。
除去原料单体及其小分子聚合物的方法文献报道:用二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基甲酰胺:醋酸:水:乙醇(5:10:30:20)混合液洗脱。除去蜡质的方法文献报道:用甲醇:二氯乙烷(1:1)混合液洗脱。
建议较好的可行方法:取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.5倍体积的5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。
用过的聚酰胺,一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水洗脱至pH中性,重复使用。
2222222222
5楼2007-02-09 11:25:28
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jxglyh

银虫 (初入文坛)

新买回来的聚酰胺有说明书的按说明书处理,没有说明书的看下面内容:

★ ★
karl2100(金币+2):不错,回答楼主提出的问题后我们会适当加金币,用不着“请求加金币”。每天会有专门评分的版主进行评贴。最后,谢谢!
工业乙醇浸泡过夜后装柱,用3~4倍体积的工业乙醇洗涤,最后洗涤液水浴蒸干,待只有少量杂质后,2倍氢氧化钠的低浓度溶液洗涤,最后1倍量水洗,然后2~3倍10%的醋酸洗涤,最后用蒸馏水洗。
新买回来的聚酰胺有说明书的按说明书处理,没有说明书的看下面内容:
聚酰胺(Polyamide)是由酰胺聚合而成的一种高分子化合物,商品名:锦纶、尼龙。
锦纶中通常有两种杂质:一种是锦纶的聚合原料单体及其小分子聚合物。另一种是蜡质(锦纶丝再制成以后,表面涂有一层蜡)。这些杂质必须除去,否则原料单体及其小分子聚合物可与酚类物质形成复合物。蜡质能被醇液洗脱下来,与分离之物质混在一起则难以除去。
除去原料单体及其小分子聚合物的方法文献报道:用二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基甲酰胺:醋酸:水:乙醇(5:10:30:20)混合液洗脱。除去蜡质的方法文献报道:用甲醇:二氯乙烷(1:1)混合液洗脱。
建议较好的可行方法:取聚酰胺以90-95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入柱中。用3-4倍体积的90-95%乙醇洗脱,洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2-2.5倍体积的5%NaOH水溶液、1倍体积的蒸馏水、2-2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗脱,最后用蒸馏水洗脱至pH中性,备用。
用过的聚酰胺,一般用5%NaOH水溶液洗脱,洗至NaOH水溶液颜色极淡为止。有时因某些鞣质与聚酰胺又不可逆吸附,用NaOH水溶液很难洗脱,可用5%NaOH在柱中浸泡,每天将柱中的NaOH水溶液放出一次,并加入新的5%NaOH水溶液,这样浸泡一周后,鞣质可基本洗脱完。然后用蒸馏水洗脱至pH8-9,再用2倍量的10%醋酸水溶液洗脱,最后蒸馏水洗脱至pH中性,重复使用。
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6楼2007-02-09 11:27:36
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