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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 多核现象的基因敲除
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talang123

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talang123

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1楼 2011-12-22 20:32:05
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

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看天(金币+3): 鼓励回答 2011-12-23 22:45:49
多核？是指多倍体吧。
设计过二倍体酵母的敲除，思路很简单，
正常做敲除，PCR鉴定看是敲掉了1个，还是两个都敲掉了，如果只敲除了一个，在基因两端设计引物，会扩增到两条带，一条基因条带，一条插入抗性基因条带。
然后再设计引物敲第二个，此时设计引物在第一次敲除的基础上向基因内部设计一点，两对引物的关系相当于巢式引物的关系，然后用另外一种抗性基因再敲除第二个基因。
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talang123
Thank-you，so-blue.
2楼2011-12-23 09:28:15
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talang123

禁虫 (初入文坛)
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3楼2011-12-23 13:29:17
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-12-23 22:46:11
用孢子呗，孢子是单核的...
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4楼2011-12-23 22:23:29
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talang123

禁虫 (初入文坛)
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5楼2012-03-13 21:01:31
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talang123

禁虫 (初入文坛)
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6楼2012-03-13 21:05:35
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
6楼: Originally posted by talang123 at 2012-03-13 21:05:35:
我所作的核盘菌每个原生质体里面有几十个细胞核，远远不止两个，所以我想你那么设计引物的话还是做不出来吧，你提供的方法是不是只适合两个细胞核的呢？不过还是要谢谢你哦

几十个核，那就爱莫能助了。
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talang123
Thank-you，so-blue.
7楼2012-03-14 08:53:08
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talang123

禁虫 (初入文坛)
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8楼2012-03-19 19:15:38
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by talang123 at 2012-03-19 20:15:38
是啊，所以我一直都不想做。...

请问你现在有方法了吗？我也在做一个多核真菌的基因功能，正愁怎么做呢。请问你是姜老师的学生吗？是的话，你什么时候有时间我去请教。
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9楼2014-12-17 11:31:09
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rabbit12510

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hihe99 at 2014-12-17 11:31:09
请问你现在有方法了吗？我也在做一个多核真菌的基因功能，正愁怎么做呢。请问你是姜老师的学生吗？是的话，你什么时候有时间我去请教。...

你好，请问你的基因敲除实验成功了吗
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10楼2019-01-05 18:59:35
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