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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于质粒
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[交流] 关于质粒

在生产菌中导入一个重组质粒如携带一个插入基因的pBR322，且在发酵过程中并未加入IPTG诱导，那么蛋白是如何表达的？并且蛋白是在菌体生长到什么阶段开始表达的？谢谢
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1楼 2011-12-20 22:47:11
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★ ★
wwdxx2004(金币+1):谢谢参与
看天(金币+1): 鼓励交流 2011-12-21 12:36:41
wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 15:18:29
做过不加IPTG的  培养三天都未见表达
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2楼2011-12-21 09:43:23
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lwq652

木虫 (正式写手)
★
wwdxx2004(金币+1):谢谢参与
wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 15:19:42
看你基因是不是诱导表达的
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3楼2011-12-21 12:58:04
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-12-21 09:43:23:
做过不加IPTG的  培养三天都未见表达

我的这个菌一定是表达了 但是就是不清楚是什么时期表达的 请问您知道吗？
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4楼2011-12-21 15:19:25
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwq652 at 2011-12-21 12:58:04:
看你基因是不是诱导表达的

请问要怎么知道这个基因需不需要诱导呐？我当时连接的时候并没有带着这个基因的调控区，只是从SD序列开始的。
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5楼2011-12-21 15:22:58
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lwq652

木虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 16:09:26
哦，那你应该是诱导表达的
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6楼2011-12-21 15:44:47
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lwq652 at 2011-12-21 15:44:47:
哦，那你应该是诱导表达的

但是我在发酵过程中并没有加IPTG啊？是因为培养基成分比较复杂吗？那么怎么知道他是在什么时候开始表达的呐？谢谢您了！
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7楼2011-12-21 16:09:14
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
wwdxx2004(金币+1):谢谢参与
关键是启动子，有些不是乳糖操纵子相关的IPTG诱导启动子，当然不用诱导就可以表达了
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8楼2011-12-21 16:15:17
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lwq652

木虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 2011-12-22 09:03:12
如果你的培养基很复杂，那么有可能里面也含有乳糖半乳糖之类的，那就这些物质待葡萄糖耗尽时亦可诱导表达

[ Last edited by lwq652 on 2011-12-21 at 22:13 ]
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9楼2011-12-21 22:12:00
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-21 16:15:17:
关键是启动子，有些不是乳糖操纵子相关的IPTG诱导启动子，当然不用诱导就可以表达了

这个质粒就是乳糖操纵子的 请问不用诱导的话 蛋白什么时候表达呐？
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10楼2011-12-21 22:32:08
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
wwdxx2004(金币+1): 谢谢！ 2011-12-22 09:05:27
引用回帖:
10楼: Originally posted by wwdxx2004 at 2011-12-21 22:32:08:
这个质粒就是乳糖操纵子的 请问不用诱导的话 蛋白什么时候表达呐？

这个好像不太可能表达，还真没遇到过
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11楼2011-12-22 08:30:33
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lwq652 at 2011-12-21 22:12:00:
如果你的培养基很复杂，那么有可能里面也含有乳糖半乳糖之类的，那就这些物质待葡萄糖耗尽时亦可诱导表达
[ Last edited by lwq652 on 2011-12-21 at 22:13 ]

我的培养基里就是一些盐类 牛肉膏 蛋白胨 酵母粉 是不是也可能含有乳糖半乳糖之类具体我也不是很清楚……
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12楼2011-12-22 09:05:01
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lwq652

木虫 (正式写手)
看来你是没有在质粒里面引进启动子，那应该表达不出来的
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13楼2011-12-22 10:21:00
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zc10052157

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wwdxx2004 at 2011-12-21 15:19:25:
我的这个菌一定是表达了 但是就是不清楚是什么时期表达的 请问您知道吗？

那你就做个时间梯度看看
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14楼2011-12-22 15:09:57
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henyg8

禁虫 (初入文坛)
★
wwdxx2004(金币+1):谢谢参与
silicare(屏蔽内容): 2011-12-22 17:19:34
本帖内容被屏蔽
15楼2011-12-22 16:07:01
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by lwq652 at 2011-12-22 10:21:00:
看来你是没有在质粒里面引进启动子，那应该表达不出来的

我用的是质粒上的乳糖启动子
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16楼2011-12-22 21:26:37
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