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关于质粒
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wwdxx2004
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关于质粒
在生产菌中导入一个重组质粒如携带一个插入基因的pBR322,且在发酵过程中并未加入IPTG诱导,那么蛋白是如何表达的?并且蛋白是在菌体生长到什么阶段开始表达的?谢谢
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2011-12-20 22:47:11
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看天(金币+1): 鼓励交流 2011-12-21 12:36:41
wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 15:18:29
做过不加IPTG的 培养三天都未见表达
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2楼
2011-12-21 09:43:23
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wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 15:19:42
看你基因是不是诱导表达的
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2011-12-21 12:58:04
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Originally posted by
zc10052157
at 2011-12-21 09:43:23:
做过不加IPTG的 培养三天都未见表达
我的这个菌一定是表达了 但是就是不清楚是什么时期表达的 请问您知道吗?
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4楼
2011-12-21 15:19:25
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lwq652
at 2011-12-21 12:58:04:
看你基因是不是诱导表达的
请问要怎么知道这个基因需不需要诱导呐?我当时连接的时候并没有带着这个基因的调控区,只是从SD序列开始的。
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5楼
2011-12-21 15:22:58
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wwdxx2004(金币+1): 2011-12-21 16:09:26
哦,那你应该是诱导表达的
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6楼
2011-12-21 15:44:47
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6楼
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Originally posted by
lwq652
at 2011-12-21 15:44:47:
哦,那你应该是诱导表达的
但是我在发酵过程中并没有加IPTG啊?是因为培养基成分比较复杂吗?那么怎么知道他是在什么时候开始表达的呐?谢谢您了!
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7楼
2011-12-21 16:09:14
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wwdxx2004(金币
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关键是启动子,有些不是乳糖操纵子相关的IPTG诱导启动子,当然不用诱导就可以表达了
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8楼
2011-12-21 16:15:17
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wwdxx2004(金币+1): 2011-12-22 09:03:12
如果你的培养基很复杂,那么有可能里面也含有乳糖半乳糖之类的,那就这些物质待葡萄糖耗尽时亦可诱导表达
[
Last edited by lwq652 on 2011-12-21 at 22:13
]
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9楼
2011-12-21 22:12:00
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8楼
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Originally posted by
joan198108
at 2011-12-21 16:15:17:
关键是启动子,有些不是乳糖操纵子相关的IPTG诱导启动子,当然不用诱导就可以表达了
这个质粒就是乳糖操纵子的 请问不用诱导的话 蛋白什么时候表达呐?
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10楼
2011-12-21 22:32:08
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joan198108
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wwdxx2004(金币+1): 谢谢! 2011-12-22 09:05:27
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10楼
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Originally posted by
wwdxx2004
at 2011-12-21 22:32:08:
这个质粒就是乳糖操纵子的 请问不用诱导的话 蛋白什么时候表达呐?
这个好像不太可能表达,还真没遇到过
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11楼
2011-12-22 08:30:33
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9楼
:
Originally posted by
lwq652
at 2011-12-21 22:12:00:
如果你的培养基很复杂,那么有可能里面也含有乳糖半乳糖之类的,那就这些物质待葡萄糖耗尽时亦可诱导表达
[
Last edited by lwq652 on 2011-12-21 at 22:13
]
我的培养基里就是一些盐类 牛肉膏 蛋白胨 酵母粉 是不是也可能含有乳糖半乳糖之类具体我也不是很清楚……
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12楼
2011-12-22 09:05:01
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lwq652
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看来你是没有在质粒里面引进启动子,那应该表达不出来的
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13楼
2011-12-22 10:21:00
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Originally posted by
wwdxx2004
at 2011-12-21 15:19:25:
我的这个菌一定是表达了 但是就是不清楚是什么时期表达的 请问您知道吗?
那你就做个时间梯度看看
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14楼
2011-12-22 15:09:57
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henyg8
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silicare(屏蔽内容): 2011-12-22 17:19:34
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2011-12-22 16:07:01
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13楼
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Originally posted by
lwq652
at 2011-12-22 10:21:00:
看来你是没有在质粒里面引进启动子,那应该表达不出来的
我用的是质粒上的乳糖启动子
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16楼
2011-12-22 21:26:37
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