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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 化学键的确定
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chemicalb

至尊木虫 (知名作家)

[交流] 化学键的确定

我手头有混合物蛋白A（各种组分是清楚的，仅仅是混合），与B物质反应，
可能发生交联反应。

现在的问题是：怎样确定交联位点？
推测蛋白上Arg与B物质上的R集团反应。

使用质谱，具体怎么操作？谢谢啊。
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1楼 2011-12-19 23:43:00
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
★
chemicalb(金币+2):谢谢参与
用酶将蛋白质水解，液相色谱分析组分。
合成精氨酸或其他含有多余氨基的氨基酸与B物质反应（非阿尔法氨基成键），作为标准物质，与酶解液峰位比较，确定交联氨基酸残基！
如果含有确定某种残基后，蛋白质有含有多个这种残基，在做定点突变依次查找。

不过，如果你做的是化学方法修饰的话，一般专一性不好。

个人愚见！
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4楼2011-12-23 15:38:49
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huazhzh

木虫 (正式写手)
★
chemicalb(金币+2):谢谢参与
理论上应该是用软电离质谱 比如ESI-MS，再加上二级甚至三级质谱（MSn）确定i产物分子量以及碎片离子的质量数来判断反应物的键合位置。看过一些文献用此方法确定植物体内反应蛋白质的断裂位置。至于具体怎么操作，就要看你用什么样的质谱仪器了。要找专业人士来做的。对于这种非常有针对性的问题，可能需要熟练的人对于质谱的参数也要稍微修改一下以便能更好的解决问题。
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2楼2011-12-22 21:04:51
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chemicalb

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huazhzh at 2011-12-22 21:04:51:
理论上应该是用软电离质谱 比如ESI-MS，再加上二级甚至三级质谱（MSn）确定i产物分子量以及碎片离子的质量数来判断反应物的键合位置。看过一些文献用此方法确定植物体内反应蛋白质的断裂位置。至于具体怎么操作， ...

谢谢啊。
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3楼2011-12-23 12:38:33
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chemicalb

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chaijudi at 2011-12-23 15:38:49:
用酶将蛋白质水解，液相色谱分析组分。
合成精氨酸或其他含有多余氨基的氨基酸与B物质反应（非阿尔法氨基成键），作为标准物质，与酶解液峰位比较，确定交联氨基酸残基！
如果含有确定某种残基后，蛋白质有含有 ...

thx.
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6楼2011-12-24 14:48:17
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