应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr一直不出结果，可以从哪些方面调整
142/2返回列表上一页12
查看: 2776  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

vickievickie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试一下梯度温度退火呗~温度太高了吧
赞一下 回复此楼
祝我的实验一发不可收拾
11楼2011-12-19 14:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-12-19 16:45:45
看了半天，不知道你的模板是质粒？还是基因组？还是RT 产物？不同模板对引物的要求也不同，如果是质粒，随便的引物都能扩出来，如果是后两种，一定要设计特异性比较高的引物来扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-12-19 14:43:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

还有，你的目的片段1200，你用50S的延伸时间肯定不行，一般你这长度至少需要1MIN10S的时间，如果是PFU酶来扩增，时间要加倍，所以你自己去调节吧。
赞一下 回复此楼
13楼2011-12-19 14:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghd2826

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): 我觉得这个讲得很有道理！破格授予专家指数一枚！ 2011-12-19 16:47:25
恶魔眼球(金币+1): ★★★很有帮助 2011-12-25 10:40:17
之前我也遇到过楼主一样的问题，照片简直一模一样的（不过maker跑的比你的好。。呵呵），下面是个人的一点经验：
1、首先既然在58度时曾经扩出来过，那至少说明模板和引物没啥大问题（除非之后你又换过模板）
2、模板引物没啥大问题就是优化PCR条件了，方法很多，梯度，降落，巢氏PCR等都可以，但是要找到适合你基因的方法（最好查文献），先从tm入手，可以用你两条引物中tm值较低的那条，再减去个4度试下，当然也可以做个梯度，如果效果还是这样的话（只有二聚体），我就深度怀疑是模板的问题了，因为之前我做也是试了很多条件，酶也换过，mix和分开的Taq都用过，体系也换过，就是出不来，后来重新提了rna反转录之后，一下就出来了，我感觉优化条件是在有条带的情况之下才考虑的，连带都没有纠结优化条件就有点不合适了。
3、另外，建议你用引物设计软件，最好是Oligo 来检测下你的两条引物，Oligo比较全面，看下引物有没有loop之类的二级结构，如果有的话，就得适当提高退火温度。
4、不知道你的引物是简并引物呢还是特异引物，特异引物会简单点，如果是简并引物，而且简并度高的话（大于1000），那就干脆把退火温度设在45-50就ok，适当缩短延伸时间。
个人的一点经验，希望对你有用，祝顺利！
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2011-12-19 15:37:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 恶魔眼球 的主题更新
142/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭