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zengwenqin

银虫 (正式写手)


xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2012-01-11 19:13:45
这样啊,那还是建议你用大鼠先做药动吧,如果你们实验室有微透析技术的话,可以考虑用微透析做脑组织的
11楼2011-12-19 20:28:54
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springcoool

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2012-01-11 19:13:56
有没有雌雄差异呢? 有些在采血时明显有偏差的可以先标记好,不进入模拟
沉着冷静,韬光养晦,有所作为
12楼2012-01-11 15:03:43
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frh-19850621

铜虫 (小有名气)

我想请教一下你脑匀浆提取过程
13楼2012-01-27 14:10:11
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

★ ★
xiaoxiao270(金币+2): 3Q 2012-02-02 19:53:25
引用回帖:
13楼: Originally posted by frh-19850621 at 2012-01-27 14:10:11:
我想请教一下你脑匀浆提取过程

摘眼球取血之后,断头处死小鼠,迅速取出整个脑组织,置于玻璃培养皿中,将皿放于冰袋上,仔细去除脑部膜及可见血管,将脑组织置于玻璃匀浆器中,加生理盐水制成20%的匀浆液,手动匀浆至均匀,将匀浆液转移至2毫升EP管中,12000转离心5分钟。
取上清液0.5毫升至10毫升尖底玻璃离心管中,精密加入石油醚-乙酸乙酯(1:1,v/v)2毫升萃取,涡旋混匀,3000转离心10分钟,将将上清转移至另一干净尖底玻璃管中,30摄氏度减压挥干溶剂,200微升甲醇复溶。
色谱条件:LC-20A高效液相色谱仪,流速:1.0ml/min,检测波长:λ=254nm,进样量:20μL,柱温:35摄氏度,梯度洗脱条件:甲醇-0.1%磷酸,0.01min,60%甲醇,5.0min,75%甲醇,15.0min,75%甲醇,16.0min,60%甲醇,18.01min,stop。
请大家帮忙分析一下问题出在哪里?
心态比能力重要
14楼2012-02-01 10:08:11
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匿名


xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-02 19:53:37
本帖仅楼主可见
15楼2012-02-02 15:58:18
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yangsitao

铁虫 (正式写手)


karl2100(金币+1): 多谢指教! 2012-02-02 19:00:31
首先你的取样时间没设计好,其实取样时间点不要这么多,只要在Cmax前取三个点,后面的在取三个共七个就可以了。时间间隔也不对,请你不要按别人文章上的弄,要结合你药物的特点取药时间在你药物的3到4半衰期就可以了。再者请你用das来处理你的数据,这样会更好。其实你也可以在你现在的数据对取样点进行取舍。出现两个峰可能存在肝肠循环。
呵呵还想和楼主说一下,动物实验嘛,个体差异太大了,其实说真的8只小鼠和你做4只就没什么差别,不就是sd值变得更小。
卖身,不卖肉。
16楼2012-02-02 17:01:20
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by swordyong at 2012-02-02 15:58:18:
你的实验目的是想了解三种成分的PK过程,但是通过你的实验结果来看该PK设计是不成功的,通过一只大鼠的图来看你的实验设计采样时间不够,半衰期没有掌握好,消除相还没有完全出来,没有考虑肠肝循环等!所以在此 ...

谢谢你的回复!采用大鼠进行试验是否要重新考察检测的方法学呢?我之前采用大鼠眼底静脉采血,但是容易在采血点延误时间,导致采血时间不准确,后期采血比较困难;之后我又改为乙醚麻醉,固定大鼠,股动脉插管采血,采血时间可以很好地控制,每次取血后补充同样体积的肝素,但是采血后期大鼠状态愈来愈差,比如今天早上九点给药,到晚上九点测试了十二个小时,第二天早上九点(24小时)再去采血时,大鼠状态就很差了,股动脉周围的组织变干,打进去肝素再抽血也不容易采到,在往后的时间点大鼠可能就死了,也就没办法获得血药浓度了。所有就出现药时曲线消除相没有达到2~3个半衰期。请老师们指点啊,如何解决这一问题?
心态比能力重要
17楼2012-02-03 11:02:53
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by swordyong at 2012-02-02 15:58:18:
你的实验目的是想了解三种成分的PK过程,但是通过你的实验结果来看该PK设计是不成功的,通过一只大鼠的图来看你的实验设计采样时间不够,半衰期没有掌握好,消除相还没有完全出来,没有考虑肠肝循环等!所以在此 ...

照您说的,先用5~6只大鼠测试药物在血中的动力学过程(比如设计7个采样点),取均值,得到药物的吸收、达峰、消除时间,再取新的7只大鼠,分别在吸收相不同时间点处死3只,达峰时处死1只,消除相不同时间点处死3只,取脑,制备脑匀浆,测定脑中药物浓度?对脑中浓度的考察再重复至少3次,不知道这样考虑可以吗?
心态比能力重要
18楼2012-02-03 11:13:32
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by yangsitao at 2012-02-02 17:01:20:
首先你的取样时间没设计好,其实取样时间点不要这么多,只要在Cmax前取三个点,后面的在取三个共七个就可以了。时间间隔也不对,请你不要按别人文章上的弄,要结合你药物的特点取药时间在你药物的3到4半衰期就可以 ...

非常感谢您的提醒和回复!从我的药时曲线上看,药物在小鼠体内存在同样时间(比如300分钟)的血药浓度是差异很大的,有的小鼠在给药后420分钟体内药物已经基本消除完了,有的小鼠则在给药后420分钟体内药物浓度很高,对420分钟的小鼠血药浓度取均值,与其他时间点共同拟合曲线,就导致药时曲线出现多个峰值。对各组的血药浓度值进行了可疑值取舍之后(Q检验或G检验)再次拟合也是如此多个峰值。
心态比能力重要
19楼2012-02-03 11:31:13
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hyfwkd

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-02-03 11:02:53:
谢谢你的回复!采用大鼠进行试验是否要重新考察检测的方法学呢?我之前采用大鼠眼底静脉采血,但是容易在采血点延误时间,导致采血时间不准确,后期采血比较困难;之后我又改为乙醚麻醉,固定大鼠,股动脉插管采 ...

你这PK实验数据肯定不能要,首先股动脉取血,大鼠始终处于麻醉或者固定状态,另外对大鼠的伤害也特别大,试问这种病理状态怎么出来正常的结果啊,建议你向你们药理的老师学学怎么连续取血,常用的颈静脉插管,眼底静脉采血等等,先练上半个月再做实验吧
20楼2012-02-08 10:42:54
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