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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何证明两种蛋白质功能上互补
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温润如玉73

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何证明两种蛋白质功能上互补

我现在的实验需要证明两种蛋白功能上是互补的。我已经将两个基因A,B分别敲除掉了，结果都没有太大变化，但是将两个基因A+B共同缺失，与对照相比，差异很大。就推测A和B蛋白在功能上是互补的。想问问有经验的人，有没有什么快速方便的方法能检测到A和B蛋白互补关系。
      比如说两种荧光标记，WESTERN等就不必了。谢谢啦。
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1楼 2011-12-13 23:23:56
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
互补和互做没关系吧，怎么用WESTERN和荧光呢，请问这两种是什么类型的蛋白
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2楼2011-12-13 23:52:37
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温润如玉73

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by shaquila at 2011-12-13 23:52:37:
互补和互做没关系吧，怎么用WESTERN和荧光呢，请问这两种是什么类型的蛋白

先谢谢了。是这样的情况。A蛋白是黄素还原酶，B蛋白是硫氧还蛋白还原酶。我当时做的突变株，单独突变掉A或者B，都没有变化；将A和B共同缺失，变化很大。将双突变株中回补A或者B，又恢复表型了。所以推测A和B蛋白在功能上是互补的。为了证明蛋白的情况，我导师让我做WESTEN，但是我想明年正常毕业，文章还没有发，就欠缺这部分证明，做WESTERN又比较浪费时间，所以想问问有没有什么有效的方法。
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3楼2011-12-14 00:44:30
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amms_8

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分别敲除掉，没有太大变化是什么意思？
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4楼2011-12-14 08:01:53
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我觉得楼主你的实验结果基本可以证明了，如果做WB是看蛋白表达差异，只能说明蛋白被敲除不表达，其实在转录水平做一个分子验证也可以的。如果要分析这两个蛋白是否互补，最好能找到共同底物，证明它对底物摧化水平的影响，可以测酶活，可以测体内产物水平。酶的功能是在底物和产物上体现的吧。个人想法，仅供参考…
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5楼2011-12-14 08:30:46
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yidC423R

银虫 (初入文坛)
你所做的，无法证明两者互补；最多证明两者参与的通路有交叉。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2011-12-14 18:03:19
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hongyz

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yidC423R at 2011-12-14 18:03:19:
你所做的，无法证明两者互补；最多证明两者参与的通路有交叉。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

正解。
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7楼2011-12-14 23:55:23
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温润如玉73

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by amms_8 at 2011-12-14 08:01:53:
分别敲除掉，没有太大变化是什么意思？

我们的实验菌株具有磁性，静置后可以用磁铁吸附上来菌体。分别敲除基因后，与野生型比较，仍具有磁性；而双突变株则没有磁性了。这就是最大的区别。
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8楼2011-12-15 23:21:53
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