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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒发生重组,建议换下感受态试试
11楼2011-12-15 20:57:11
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cxcx1013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 测序是个好方法 2011-12-28 12:46:27
西瓜: 回帖置顶 2011-12-28 12:46:45
从载体要连入目的基因的上游设计个引物测个序看看。。。分析一下序列,或许能有一点儿眉目、、、
12楼2011-12-18 12:11:12
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sunjiutong

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流经验 2011-12-28 12:47:13
通过楼主的描述,本人也曾遇到过类似的问题,可能是酶切有问题,或者酶切以后,酶切位点甲基化了,建议楼主换酶切位点。
所谓梦想,只有醒来才有可能实现
13楼2011-12-18 21:37:20
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kfsh

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流。以前看过个文章,说TE里EDTA浓度并不高,酶切时影响不大,不过本人没验证过哈 2011-12-28 12:48:15
你是用TE溶的质粒吗?TE溶的质粒会影响酶切效果
我觉得可能是你的载体有点大,没完全转进去吧,只转进去一部分,如果这部分没连成环状的板上就不能长菌落了
14楼2011-12-19 17:15:27
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wangjiasi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-28 12:54:28
两个可能
1链接效率的问题,600bp目的片段连10k的载体,摩尔比优化一下吧,或者连接时加peg4000试试
2 转化效率太低,最好做个对照
至于提取质粒不对,这很正常
15楼2011-12-28 03:06:32
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hww2012100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近也是这样,酶切后的目的片段和酶切载体大小都对,只要连上,大小就变了,是从原来的14kb 变到5kb,并且挑的单克隆也是阳性的,扩增的目的片段特亮,只要一提质粒大小都变。试了好多次,还是这样,上面的建议我看了,我的都没错,真的有点莫名其妙了。
16楼2013-01-10 19:32:54
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hww2012100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再追加一下,你的感受态有没有超过半年,还有专化体积不能超过感受态的1/10
17楼2013-01-10 19:34:07
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by hww2012100 at 2013-01-10 19:32:54
我最近也是这样,酶切后的目的片段和酶切载体大小都对,只要连上,大小就变了,是从原来的14kb 变到5kb,并且挑的单克隆也是阳性的,扩增的目的片段特亮,只要一提质粒大小都变。试了好多次,还是这样,上面的建议我 ...

我和你一样,你解决了没啊。。
18楼2013-06-25 12:44:35
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再见独奏

铁虫 (初入文坛)

刚刚也遇到了这个问题,有没有解决的?
19楼2014-11-18 09:02:52
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whatsao

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-06-25 12:44:35
我和你一样,你解决了没啊。。...

我也遇到了这种情况。原本9kb的连接质粒,转化后挑取单菌落,提取的质粒只有3kb。
20楼2015-06-08 16:50:49
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