【答案】应助回帖

11楼2011-12-15 20:57:11

cxcx1013

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+1): 测序是个好方法 2011-12-28 12:46:27
西瓜: 回帖置顶 2011-12-28 12:46:45

从载体要连入目的基因的上游设计个引物测个序看看。。。分析一下序列，或许能有一点儿眉目、、、

12楼2011-12-18 12:11:12

sunjiutong

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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+1): 鼓励交流经验 2011-12-28 12:47:13

通过楼主的描述，本人也曾遇到过类似的问题，可能是酶切有问题，或者酶切以后，酶切位点甲基化了，建议楼主换酶切位点。

所谓梦想，只有醒来才有可能实现

13楼2011-12-18 21:37:20

kfsh

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【答案】应助回帖

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西瓜(金币+1): 鼓励交流。以前看过个文章，说TE里EDTA浓度并不高，酶切时影响不大，不过本人没验证过哈 2011-12-28 12:48:15

你是用TE溶的质粒吗?TE溶的质粒会影响酶切效果
我觉得可能是你的载体有点大,没完全转进去吧,只转进去一部分,如果这部分没连成环状的板上就不能长菌落了

14楼2011-12-19 17:15:27

wangjiasi

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西瓜(金币+2): Good！ 2011-12-28 12:54:28

两个可能
1链接效率的问题，600bp目的片段连10k的载体，摩尔比优化一下吧，或者连接时加peg4000试试
2 转化效率太低，最好做个对照
至于提取质粒不对，这很正常

15楼2011-12-28 03:06:32

hww2012100

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【答案】应助回帖

我最近也是这样，酶切后的目的片段和酶切载体大小都对，只要连上，大小就变了，是从原来的14kb 变到5kb，并且挑的单克隆也是阳性的，扩增的目的片段特亮，只要一提质粒大小都变。试了好多次，还是这样，上面的建议我看了，我的都没错，真的有点莫名其妙了。

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16楼2013-01-10 19:32:54

hww2012100

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【答案】应助回帖

再追加一下，你的感受态有没有超过半年，还有专化体积不能超过感受态的1/10

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17楼2013-01-10 19:34:07

ivyvampire

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引用回帖:

16楼: Originally posted by hww2012100 at 2013-01-10 19:32:54
我最近也是这样，酶切后的目的片段和酶切载体大小都对，只要连上，大小就变了，是从原来的14kb 变到5kb，并且挑的单克隆也是阳性的，扩增的目的片段特亮，只要一提质粒大小都变。试了好多次，还是这样，上面的建议我 ...

我和你一样，你解决了没啊。。

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18楼2013-06-25 12:44:35