| 查看: 4134 | 回复: 24 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
|
||
|
我的目的基因大小是600多bp,两端加的是SmaI,SacI。首先是连在easy-T载体上，酶切鉴定可以切出目的条带。 用XmaI,SacI分别切T载体和我的表达载体，切T可以切出目的片段，表达载体本来两个酶切位点中间有1000多的片段，用上述两个酶切也可以切出，将我的目的片段和表达载体回收，连接，转化，连续做了5，6次，有几次是不长菌，有三次都只长一个菌，但是提质粒，质粒大小明显变小，我的表达载体是10K多，只跑出一条3K的带，酶切鉴定的结果是切出两条带，一条3K多，一条5K以上的带，没有目的条带。。。。 首先涂板的抗性问题可以排除，是正确的。。。 连接转化也换过别人做，也是同样的结果。。 且有3次都是同样的长一个菌。。。提质粒酶切结果也是一样。。。 每次连接的载体和目的基因都是重新切的。。。 补充：提质粒，胶回收均使用的试剂盒。。。且回收后跑胶，可以清晰看到自己目的片段和载体。。。 这是载体的大小还是5K以上。。。但是一连接转化就不对 了。。。。已经做了一个多月了。。。请大家帮分析一下吧。。万分感谢！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有94人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
19楼2014-11-18 09:02:52
2楼2011-12-13 20:42:36
guojianping
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 14 (小学生)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 2436.4
- 散金: 13
- 红花: 3
- 帖子: 494
- 在线: 49小时
- 虫号: 919955
- 注册: 2009-12-04
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-12-14 20:23:04
4楼2011-12-14 21:44:32