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pcr
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| pcr扩增一段序列 这段序列中有一段连续重复的GCCTCC 扩增产物拿去测序比对 发现少了一个GCCTCC 有可能是pcr扩增过程中出现问题了吗？ |
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cdl007
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-12 18:19:28
zds2257(金币+2): 引物结合位点没错 其他地方扩增也没什么错误 看来序列本来就这样 不过现在正在验证 2011-12-12 23:28:16
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amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-12-12 18:19:28
zds2257(金币+2): 引物结合位点没错 其他地方扩增也没什么错误 看来序列本来就这样 不过现在正在验证 2011-12-12 23:28:16
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PCR反应是个概率事件 引物特异性结合在互补位置，但是也有可能结合在其他位置，这跟引物设计中的G自由能相关。 同时，taq酶的突变率1/1000,如果太长的序列，有错配是正常的， 但是楼主的序列正好差gcctcc，taq酶的突变不会这样， 建议楼主重新pcr，测序，或者多做几个孔，同时测序， 如果还有问题可以试试提高退火温度，或者重新设计一下上下游引物 |
2楼2011-12-12 13:21:30
3楼2011-12-13 09:38:37
4楼2012-01-14 11:56:30
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5楼2012-01-17 15:28:58
wangdunzju
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6楼2012-01-17 16:44:42